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( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 10 期 　　　　　　　　 　 　 　　　　　　 　 　　　 2002 年 10 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1237～1239 聚中性红作电子转移介体的过氧化氢生物传感器 张国荣 　刘海燕　王艳玲 ( 山东师范大学化学系 , 济南 250014) 摘 　要 　提出一种新的第二代电流型生物传感器。将易溶于水的电子转移介体中性红经电聚合在石墨电极 表面形成一层致密、稳定的膜 ,有效的减少了其流失。并在辣根过氧化酶的表面覆盖一层明胶 ,再用戊二醛交 联制备了 H O 传感器 ,使固定化酶保持了较高活性。该生物传感器具有较宽的线性范围 :2. 0 ×10- 5 ～2. 5 × 2 2 10- 2 molL ;检出限为 1. 8 ×10- 5 molL , 达到 95 %稳态电流所用时间 20 s 。 关键词 　聚中性红 ,明胶 ,辣根过氧化酶 ,生物传感器 ,浸腊石墨电极 1 　引　　言 制备生物传感器 ,最关键的问题是如何把酶固定化并保证其活性1 。由于通常的交联法所用的交 联剂戊二醛易使酶失活 ,影响传感器的稳定性和寿命。采用覆盖一层明胶隔层再交联的方法 ,可避免戊 二醛与酶直接接触而导致酶的部分失活 ,提高了酶电极的稳定性、灵敏度 ,延长了使用寿命及存放时 间2 ,3 。 4 常选用一些疏水性的物质 ,如二茂铁及其衍生物 等作为第二代介体型电流生物传感器的电子转 移介体 ,而水溶性的碱性染料如亚甲基兰、亚甲基绿、中性红等当被固定在电极表面时 , 由于水溶性而迅 5 ( ) 6 速流失。因此 ,在以前的报道中 ,很少用此类介体 。本文将水溶性的中性红 NR 经电聚合 修饰在 ( ) 浸腊石墨电极表面 ,该聚中性红 PNR 膜附着力好、紧密均匀、稳定性好 ,有效的降低了其流失。利用此 方法制成的辣根过氧化物酶生物传感器具有较高的灵敏度、较好的稳定性及较长的使用寿命。 2 　实验部分 2. 1 　仪器和试剂 ( ) LK98 微机电化学分析系统 天津市兰力科化学电子有限公司 , 电化学实验用三电极体系。 ( ) 辣根过氧化酶 HRP ,上海东风生物技术公司 ,R. Z. - 3. 0 。所用试剂均为分析纯 ,所用水均为二 次石英重蒸水。 2. 2 　辣根过氧化酶生物传感器( HPBS) 的制备 2. 2. 1 　聚合物膜修饰电极的制备 　将浸腊石墨电极首先经过物理、化学预处理6 ,然后在最佳体系 : ( ) - 4 ( ) 0025 molL PBS pH = 6 + 0. 5 molL NaNO3 + 3. 0 ×10 molL NR 中采用 - 1. 0～0. 6 V CV 法聚合 ,其 膜厚度可由聚合过程中的扫描圈数来控制。