为学第十章药物分析完整课件.ppt

血样采集后应及时分离血浆或血清，并最好立即进行检测。如不能立即进行测定，应根据药物在血样中的稳定性及时处置，置于具塞硬质玻璃试管或EP管中密塞保存。短期保存时可置冰箱冷藏(4℃)，长期保存时需在-20 ℃或- 80 ℃下冷冻贮藏，以使样品中药物稳定，保障监测浓度的准确。 因冰冻有时可引起细胞溶解，妨碍血浆或血清的分离，或因溶血影响药物浓度变化，所以全血未经分离时，不宜直接冷冻保存。 如果待测药物在样本中易受酶的进一步代谢变化，则通常须及时采取低温冷冻或加酶抑制剂等方式处置。 2．尿液 体内药物的清除主要是通过肾脏经尿液排出。药物可以原形（母体药物）或代谢物等形式排出。尿液中药物浓度大都较高，采集方便且采集量大，但尿液浓度通常变化较大。所以，尿液药物浓度测定的目的通常与血液或唾液样品的测定目的不同，主要用于药物尿液累积排泄量、尿清除率或生物利用度的研究，以及药物代谢物及其代谢途径、类型和速率等的研究。在临床上，亦可推断患者是否违反医嘱用药。 测定尿液中药物浓度时应采集特定时间间隔内的尿液。测定尿液中药物的排泄量时，应收集用药后一定时间内（如24小时，或至基本完全排泄的其他时间），不同时间区段排泄的全部尿液，记录体积后，量取一部分用于药物浓度的测定，再乘以尿液量，计算即可求得尿药排泄量。 尿液在放置时可因细菌繁殖而变混浊，因此，尿液采集后应立即测定。若不能立即测定（如需收集24小时的尿液），必须采集后立即处置，低温保存或加人防腐剂后冷藏保存。常用的防腐剂有二甲苯、氯仿、醋酸或盐酸等。保存时间在36小时以内，可置冰箱冷藏；若需长时间保存，则应冰冻贮藏。 （二）体内样品的测定法 体内样品测定常用的方法有免疫分析法和色谱分析法。 1．免疫分析法 免疫分析法是基于抗体与抗原或半抗原之间的高选择性竞争反应而建立的一种生物化学分析法。具有很高的选择性和很低的检出限，可以应用于测定各种抗原、半抗原或抗体。 免疫分析法分为放射免疫法和荧光免疫法、发光免疫法、酶免疫法及电化学免疫法等非放射免疫法，测定的量可以达到ug甚至ng的水平。放射免疫法的灵敏度最高，是在生物样品中加入理化性质、免疫学特性与待测物相同的经放射性同位素标记的待测物。 2．色谱分析法 色谱分析法包括：气相色谱法( GC)、高效液相色谱法( HPLC)和色谱一质谱联用法( CC-MS、LC -MS)等，这些方法适用于体内复杂样品中微量药物的专属准确定量。 （三）药物动力学参数的测定 1．体内样品的采集 在急性药物中毒诊断时，应立即取样测定；当治疗药物监测时则可根据临床需要确定取样时间；当测定药物动力学参数时，大多采集给药前与给药后，药物及其代谢产物在体内的吸收、分布、代谢和排泄各阶段多个时间点的样本，以便获得完整的经时过程及其行为特征，为新药评价与临床用药提供参考。 2．药物动力学参数测定示例 目前临床上用于心衰治疗的强心苷类药物有毒毛花苷K、去乙酰毛花苷、地高辛、洋地黄毒苷等。其中，前两者因起效快、消除快、作用维持时间短，仅有注射剂供急症短期使用，一般无需进行治疗药物监测。洋地黄毒苷则因起效慢、消除慢、一旦中毒很难解救，临床偶尔使用，在需长期使用强心苷时，一般均选用地高辛。 地高辛的有效浓度(0.8~2. Ong/ml)与中毒浓度(2. 4ng/ml)接近。消除半衰期长，在成人体内约为36小时、儿童体内约为30小时，具有一级动力学特征。地高辛在肠部被吸收，口服生物利用度因剂型而有所不同，在70%~ 90%的范围变化。体内分布体积大，在心肌、骨骼肌和血红细胞中易聚集。60%~90%以原形经肾小球滤过或肾小管分泌排泄，仅有约10%在体内通过氢化、水解、结合等反应代谢，另有约7%发生肠肝循环。 在肾功能减退时，地高辛的代谢与肠肝循环比率可明显升高，并可使消除半衰期延长，血药浓度显著升高，从而有可能引起毒性。同时使用奎尼丁、钙拮抗剂、胺碘酮、普罗帕酮等心血管系统药，药物相互作用也可导致地高辛血药浓度升高。使用地高辛中毒仍是临床常见的急诊病例，尤其是老年患者。 地高辛的治疗药物监测十分重要。血清免疫法常用于临床快速监测，更专属灵敏的液一质联用法则常用于临床药物动力学及经时过程的研究。例如，以洋地黄毒苷为内标，对人血浆和尿中地高辛浓度进行LC -MS测定： (1)样品处理方法：精密吸取血浆样品1.Oml，置具塞离心管中，精密加入内标溶液(20ng/ml) 50山，加浓氨水100¨1和甲基叔丁甚醚氐文，振荡混匀30分钟后，3000 xg离心】D分钟，分取有机层，置另一离心管中，减压离心挥干，残留物用100¨l含0.25mmol/L醋酸钠的甲醇一水(40：60)流动相溶解，14000 xg离心2分钟，取上清液15山进行LC-MS分析。尿样用空白尿