第十章 质谱法和生物质谱法教学课件.ppt

在Edman循环反应中，用含有5%异硫氰酸苯酯(PIC)的异硫氰酸苯酯作为Edman反应终止剂。反应中产生PTC-肽，还产生苯氨基甲酰肽（PC-肽）。PC-肽不能进一步发生环化裂解反应。经过数次循环降解后可得到有终止剂封闭N端产生不同长度的系列肽段衍生物的混合物，进行MALDI/MS测定，可由获得质谱图相邻各肽段衍生物产生的离子峰质量差依次流出N端氨基酸顺序。 氨基酸序列分析 方法二：利用蛋白质外切酶（亮氨酸氨肽酶，羧肽酶）降解，产生一系列肽段，获得质谱图相邻各峰之间质量差读出N端或C端顺序。 氨基酸序列分析 二、糖蛋白和寡糖分析 1 糖蛋白分析 分子量，含糖量和寡糖结构分析 2 糖蛋白结构分析难点 寡糖链不均一性 低离子化效能 确定糖基位点困难 二、糖蛋白和寡糖分析 1糖蛋白分子量：MALDI-TOF 2含糖量测定：内糖苷键酶切断糖苷键得肽链，可计算肽链分子量。 糖蛋白平均分子量-肽链分子量=含糖量/糖蛋白分子质量×100%。 3糖基化位点确定：采用蛋白酶酶解糖苷内切酶相结合，网上数据库检索，确定糖基化位点。 三、核苷酸分析 寡核苷酸样品用外切酶从3’或5’端进行部分降解，不同时间内分别取样进行质谱分析，获得寡核苷酸部分降解的分子离子峰信号，通过对相邻两个碎片分子质量进行比较，计算被切割的核苷酸单体分子质量，将其与四个脱氧核苷酸标准分子量对照，读出管核苷酸