动物营养学研究现状及展望-共轭亚油酸对脂多糖刺激断奶仔猪炎性细胞因子基因表达的调控.pptVIP

共轭亚油酸对脂多糖刺激断奶仔猪炎性细胞因子基因表达的调控 赖长华 中国农业大学农业部饲料工业中心 2005.05 报告内容 研究背景 试验目的 材料与方法 试验结果 结论 炎性细胞因子 炎性细胞因子：IL-1β、IL-6 和 TNF-α 可介导系统的炎症反应，如发烧、食欲减退、降解代谢加强、合成代谢减弱但肝脏急相期蛋白合成增多 适量产生：有利于机体抵御感染 过量产生：对机体造成不同程度的损伤 特殊的结构 广泛的生物学功能 共轭亚油酸的研究现状 对实验动物或人类的研究证明，CLA抑制肿瘤等炎性疾病的发生 降低体脂沉积 增强免疫功能 免疫应激调控 共轭亚油酸的调控机理 核受体途径 过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ） 防止黏膜炎症 调控细胞因子的产生 试验目的 通过给断奶仔猪注射大肠杆菌脂多糖（LPS）造成急性炎症反应状态，探讨CLA对LPS刺激仔猪炎性细胞因子的影响及其调控机理 材料与方法 动物试验 选择28 d 断奶杂交仔猪24头，采用2?2因子试验设计分为4个处理（每处理6个重复），即日粮类型（2％大豆油或2％CLA）和免疫应激（注射LPS或生理盐水）。第14和21天腹膜注射LPS（100 ug/kg BW）和等量生理盐水，并于注射后3 h 采血分离血浆，第29 d 屠宰仔猪取脾脏和胸腺，用于提取总RNA 表1 基础日粮配方与营养成分 材料与方法 体外试验 分离仔猪外周血淋巴细胞，用RPMI1640培养液制成悬浮液，培养于24孔细胞培养板，分别加入亚油酸（LA，对照）、c9, t11-CLA、t10, c12-CLA以及二者的1:1混合物，脂肪酸在培养体系中的终浓度为100 ?mol/L 将细胞置于5％CO2、37℃下培养24 h，然后加入LPS（终浓度10 μg/mL），3 h后取细胞上清-20?C冻存。细胞沉淀物用于提取核蛋白和总RNA 材料与方法 测定指标及方法 血浆及细胞上清液细胞因子的含量 淋巴细胞PPAR γ的活性 脾脏与胸腺细胞因子和淋巴细胞PPAR γ mRNA相对含量 统计方法 用SAS软件的GLM模型进行两因子方差分析。模型主效应包括日粮类型和免疫刺激，以及二者的互作效应 试验结果 表2 CLA与LPS刺激对血浆细胞因子（pg/mL）的影响 表3 CLA与LPS刺激对脾脏炎性细胞因子和PPARγ mRNA表达的影响 表4 CLA与LPS刺激对胸腺炎性细胞因子和PPAR mRNA表达的影响 图1 c9,t11-CLA与t10,c12-CLA对外周血淋巴细胞炎性细胞因子产生量的影响 图2 c9,t11-CLA与t10,c12-CLA对外周血淋巴细胞炎性细胞因子mRNA表达量的影响 图3 c9,t11-CLA与t10,c12-CLA对外周血淋巴细胞15d-PGJ2的影响 图4 c9,t11-CLA与t10,c12-CLA对外周血淋巴细胞PPARγmRNA表达量及活性的影响 结 论 共轭亚油酸及其主要活性成分c9,t11-CLA与t10,c12-CLA都抑制了炎性细胞因子的产生及其mRNA表达。其中t10,c12-CLA的抑制作用比c9,t11-CLA强 共轭亚油酸是通过激活PPARγ或增强其mRNA表达而实现其抑制炎性细胞因子的作用 共轭亚油酸（CLA） 核受体途径 CLA ？ PP 1.0 1％预混料 0.2 赖氨酸 0.3 食盐 0.5 石粉 0.79 蛋＋胱氨酸，％ 2.3 磷酸氢钙 1.37 赖氨酸，％ 2.0 大豆油 0.34 总磷，％ 5.0 乳清粉 0.81 钙，％ 10.0 玉米蛋白粉 21.11 粗蛋白，％ 23.0 豆粕 3.34 消化能，Mcal/kg 55.7 玉米 营养成分 ％ 原料 注：试验日粮中，CLA等量替代大豆油 0.05 0.01 0.02 21.4 235.9 168.5 56.3 50.1 IL-10 d 21 NS 0.01 0.05 14.5 61 85 49 59 IL-1β 0.01 0.01 0.01 37.1 2605 3183 43 46 IL-6 0.01 0.01 0.01 130.5 4688 5840 109 112 TNF-α 0.01 0.01 0.01 25.6 264.2 182.3 69.5 52.3 IL-