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岛津国际贸易（上海）有限公司 北京分析中心 杨桂香 Tel: (010)350 Fax: (010) E_mail: fxcc@ 紫外-可见吸收光谱 电磁波谱 能级跃迁示意图 电磁波与分子相互作用时产生能级跃迁： 吸收光谱的测量Lambert-Beer 定律 紫外-可见光度计仪器组成 UV示意图 分析条件选择 UV-Vis分光光度法的应用 紫外-可见分光光度计的维护与保养 二、工作台要求 １、可承受压力 35Kg+25Kg（PC） ２、最小尺寸 ：长：1120mm，宽：710mm，高：520mm 三、电源要求 １、供电电压：100/120/220/230/240V 交流±5% 50/60Hz ２、功率消耗：约190VA ３、保险丝使用：100 - 120V供电，5A ；220 - 240V供电，3.15A ４、安装地点具备可靠的仪器接地端子 定性分析： 1. 制作试样的吸收曲线并与标准紫外光谱对照； 2. 利用Woodward-Fieser 和Scott经验规则求最大吸收波长。 即，当通过其它方法获得一系列可能的分子结构式后，可通过此类规则估算最大吸收波长并与实测值对比。 Woodward-Fieser规则 Woodward-Fieser规则估算最大吸收波长的几个实例： 二、定量分析 1. 单组份定量方法 1）标准曲线法（略） 2）标准对比法： 该法是标准曲线法的简化，即只配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx 该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。 2. 多组分定量方法 由于吸光度具有加合性，因此可以在同一试样中测定多个组份。 设试样中有两组份 X 和 Y，将其显色后，分别绘制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况： ? 图a)：X,Y 组份最大吸收波长不重迭，相互不干扰，可以按两个单一组份处理。 图b)和c) ：X,Y 相互干扰，此时可通过解联立方程组求得X和Y的浓度： 其中，X,Y 组份在波长 ?1 和 ?2 处的摩尔吸光系数 ? 可由已知浓度的 X, Y 纯溶液测得。解上述方程组可求得 cx 及 cy。 3. 双波长法---等吸收点法 当混合物的吸收曲线重迭时，如右下图所示，可利用双波长法来测定。 具体做法：将 a 视为干扰组份，现要测定 b 组份。 a)?分别绘制各自的吸收曲线； b)?画一平行于横轴的直线分别交于a组份曲线上两点，并与b组分相交； c)?以交于 a 上一点所对应的波长 ?2 为参比波长，另一点对应的为测量波长 ?1，并对混合液进行测量，得到： A1=A1a + A1b + A1s A2 =A2a + A2b + A2s 若两波长处的背景吸收相同，即A1s= A2s 二式相减，得，?A=(A1a- A2a)+( A1b- A2b) 由于 a 组份在两波长处的吸光度相等，因此， ?A=( A1b- A2b)=(?1b-?2b)lcb 从中可求出cb. 同理，可求出ca. 实例：药典中抗菌消炎药复方磺胺甲噁唑的含量测定 4. 导数光谱法 1）定义：将吸光度信号转化为对波长的导数信号的方法。导数光谱是解决干 扰物质与被子测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提 高光谱分辨率的一种数据处理技术。 2）原理： 已知 ， 对波长求一阶导数，得 可见，一阶导数信号与浓度成正比。 同样可得到二阶、三阶….n 阶导数信号亦与浓度成正比。 一、环境要求 １、使用工作温度：15～35℃，湿度：45～80%，如果温度高于30℃，则湿度必须小于70% ２、避免日光直射 ３、避免震动 ４、避免强磁场，电场 ５、远离腐蚀性气体，并避免置于任何可能导致紫外区吸收的含有机/无机试剂气体的区域 ６、避免脏污、多尘环境 六、清洁仪器外部和样品室 1、使用软布稍微蘸取水，或水溶液或者中性清洁剂溶液轻柔搽拭外表面。避免蘸取过量而导致流入仪器内部。 2、清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。 七、波长准确度检查（每半年一次） 1、该项目在UVProbe软件中检查D2灯的2个特征峰，486.0nm , 656.1nm。 2、选择“光谱模式”