山东大学研究生国家课程_基因诊断与基因治疗.pptVIP

（2）基因显微注射技术 显微注射法：把重组DNA直接注射到哺乳动物细胞的细胞质或细胞核内； 穿刺导入法：使用显微注射针穿刺细胞及细胞核，而把处于培养基内的外源DNA导入培养细胞或细胞核。 理想的载体 高感染效率 无法自我复制 可以高滴度制备 在受体细胞内长期稳定表达：数周或数年 定点整合 靶向性转移：组织特异性启动子（AFP, VEGF promoter)，hTERT promoter 高生物安全性 没有万能的载体 在现阶段Ad仍是以短期表达为治疗目标的in vivo途径基因研究最合适的载体，特别是那些单次剂量就能达到临床治疗效果的方案。如能实现Ad靶向性细胞摄取及表达，降低免疫原性，将扩展其用途，但不适合慢性疾病的长期治疗。 AAV是功能缺陷蛋白长期替代治疗最常用的载体。 3、自杀基因的基因治疗 原理：即用（逆转录）病毒载体将编码某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶可将一种无害的药物前体转变为细胞毒复合物，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而死亡）。这种基因载体只能在特定的组织或肿瘤中表达，而正常细胞中不表达。 “自杀基因” 疗法 “自杀基因”(suicide gene)的产物可将一种无害的药物(前药物)转化成有毒性的底物。 单纯疱疹病毒的胸腺嘧啶激酶(HSV1TK) 如： 自杀基因 + 病毒载体 转染 重组载体 药物前体无毒 Gene→酶→ ↓ 　　　　 药物复合物有毒 细胞死亡 例如： 单纯疱疹病毒 哺乳动物细胞 HSV Gene-TK （在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达） Gene—TK GCV（胸苷类似物） TdR P p GCV---p 抑制DNA合成 脱氧胸苷酸 肿瘤细胞死亡 邻近细胞死亡/凋亡（旁观者效应） “自杀基因” 疗法 “自杀基因” 疗法 ? “自杀基因” 疗法 ? “自杀基因” 疗法 4、反义核酸基因治疗 反义技术：是指利用人工合成的反义RNA或DNA导入靶细胞，阻断Gene的转录或复制，控制细胞的中间阶段使编码蛋白的Gene不能转录为mRNA或阻断翻译相应蛋白. 反义基因治疗 DNA DNA  RNA RNA 反义RNA