实验二、醋酸纤维薄膜电泳---+血清白蛋白分析.pptVIP

操作步骤（实验结束后）： 1.实验用品：铁镊子（4） 透明胶带（1） 2.实验材料：漂洗液一、二、三（含漂洗液） （实验台试剂架） 染色剂 3.废弃物处理：使用过毛细管放讲台纸盒。纸类放黄色“医疗废物”箱 整理干净桌面，不要遗忘东西，交实验报告！ 值日生 1 2 2 * * * 6 10 11 22 12 * 21 16 10 11 * * * 18 19 实验二醋酸纤维薄膜电泳 －－血清蛋白质分析 （请同学们自备铅笔、尺!） 2017.10.92017.10.20 电泳前 - 操作 电泳中 - 讲解，写实验报告 电泳后 - 完成实验报告并交老师 实验结束清理干净桌面 操作步骤（电泳前）： 1.实验用品：铁镊子（1/2人） 醋酸纤维薄膜（1/人） 滤纸（1/人）、胶带（贴膜在报告纸上） 2.实验材料：血清（1/台） 毛细管、吸水纸（1/台） （实验台试剂架） 巴比妥缓冲液-大表面皿(1/台) 3.电泳：90V，1小时。记住自己薄膜大概位置。 操作： 见讲义第 31页 本实验：用过的毛细管放讲台纸盒，老师处理。 用过的滤纸、吸水纸放黄色“医疗废物”箱。 一、点样准备 观察薄膜 无光泽面 1.划线：用铅笔 动作轻，防破膜，自己能看清辨认为准。 2.写座位号 无光泽面 座位号 1.5 0.5 薄膜浸润期间试点样。 （试点样用过的毛细管、纸类集中放好） 试点样：滤纸-缓冲液， 薄膜（浸润、合用）-血清 二、浸润 无光泽面 座位号 1.5 0.5 三、点样： （1）毛细管点样端选择平整一端,血清自然吸停。 （2）点样前用吸水纸稍吸一下薄膜，不点状点样。 （3）毛细管略倾斜接触膜后均匀划线点样一次。 （4）点样时移动尽量均匀，适度用力。 （5）试点样用水与点血清样品有区别。 （6）完成点样后放置于电泳槽上，记住注意事项。 （7）毛细管不能重复使用，集中放指定位置。 不 同 点 样 力 度 的 电 泳 图 谱 从左至右点样力度逐渐减小 负极连黑色或蓝色电极线，红色为正极 点样面朝下 点样端放负极 点样处离开滤纸 放平（拉直） 记住薄膜位置 四.薄膜放置电泳槽上 五.回座位清理桌面 实验方法 1.观察薄膜 无光泽面 放滤纸上划线（留距离）、标记（座位号） 2.浸润，试点样（先用缓冲液在滤纸上试点样，再用血清在缓冲液浸润过的薄膜上试点样合用） 3.点样（毛细管） 4.及时放电泳槽 点样面朝下 点样端置于负极 点样处不要放在滤纸上 放平 5.回座位清理桌面。电泳60分钟，讲解。 6.染色：染色5-10min 7.漂洗：脱色3min,3次 一、目的和要求 了解电泳的原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作。 二、实验原理 1、电泳 在外界电场的作用下，生物大分子从电极一侧向另一侧移动的现象。（电泳仪，电泳技术） 作用： 分离各种有机物。如：蛋白质、酶、核酸等。 分析物质的纯度和分子量。 2、 等电点 (isoelectric point, pI) 在一定的pH条件下,其正、负电荷数相等时,净电荷为零,这时的pH称为等电点(pI)。 氨基酸（生物大分子）在等电点时，电泳移动速度为零（不移动）。 在碱性环境中，蛋白分子带负电，往阳极移动。 在酸性环境中，蛋白分子带正电，朝阴极移动。(pH 8.6巴比妥缓冲液） 血清中各种蛋白质的等电点均低于pH7.3，在pH8.6的巴比妥缓冲液中带负电，向正极移动。分子小且带电荷多者，则移动速度较快。 ? pI % ?球蛋白 6.86~7.3 12~20 ?球蛋白 5.12 6.5~12 ?2球蛋白 5.06 4~9 ?1球蛋白 5.06 2~5 清蛋白 4.64 57~72 3、醋酸纤维薄膜电泳 采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法 优点：操作简单、快速。 缺点：分辨力不高 。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE电泳 SDS电泳 全自动血清蛋白电泳 双向电泳 4、意义： 血清蛋白质电泳是一种临床化验检查项目。 各种蛋白质的质与量的变化，反映出 机体生理、病理情况。正确的解释电泳结果，有助于