实验三 质粒DNA的酶切鉴定.ppt

限制性内切酶的切割方式 内切酶切割后产生的三种末端 * PPT课件 同裂酶:能识别相同序列，切割位点可以相同也可以不同，来源不同的酶。 （1）同裂酶（Isoschizomers) ① 完全同裂酶： 识别位点和切点完全相同。如Hind Ⅲ 和Hsu I。 同列裂酶和同尾酶 * PPT课件 Xma I 5’-C?CCGGG -3’ 3’-GGGCC?C-5’ Sma I 5’-CCC?GGG-3’ 3’-GGG?CCC-5’ 识别位点相同，但切点不同。如Xma I 和 Sma I。 ② 不完全同裂酶： Asp718I 5’-G ? GTACC-3’ 3’-CCATG ? G-5’ Kpn I 5’-GGTAC ? C-3’ 3’-C ? CATGG-5’ * PPT课件 同尾酶 ( Isocaudamers ) :识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。如BamHI、BglⅡ、BclI、XhoⅡ等 （2）同尾酶(Isocaudamers） 5’-G?GATCC-3’ 3’-CCTAG?G-5’ BamH I Bcl I 5’-T?GATCA-3’ 3’-ACTAG?T-5’ 5’-A?GATCT-3’ 3’-TCTAG?A-5’ Bgl Ⅱ 5’-U?GATCY-3’ 3’-YCTAG?U-5’ Xho Ⅱ U代表嘌呤；Y代表嘧啶。 * PPT课件 5’-?GATC----3’ 3’----CTAG?-5’ Sau3A 同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别。 ？ 5’-G 3’-CCTAG GATCT-3’ A-5’ BamHI BglⅡ 5’-GGATCT-3’ 3’-CCTAGA-5’ BamHI BglⅡ Sau3A * PPT课件 部分同裂酶的切割位点 Enzyme Sequence Isoschizomers Acc65I GGTACC CCATGG Asp718 I, Kpn I AhaIII T T TAAA AAATTT Dra I BstMA I CTGCAG GACGTC Pst I EcoRI GAATTC CTTAAG Fun II NdeI CATATG GTATAC FauND I NheI GCTAGC CGATCG AsuNH I, Bmt I NotI GCGGCCGC CGCCGGCG CciN I SmaI CCCGGG GGGCCC Cfr9 I, PspA I, Xma I, XmaC I * PPT课件 部分同尾酶切割位点 Enzyme Sequence Isoschizomers BamHI 5’-GGATCC-3’ 3’-CCTAGG-5’ Bcl I, Bgl II 5’-AGATCT-3’ 3’-TCTAGA-5’ Bcl I 5’-TGATCA-3’ 3’-ACTAGT-5’ BamH I, Bgl II Bgl II 5’-AGATCT-3’ 3’-TCTAGA-5’ Bcl I, BamH I Pst I 5’-CTGCAG-3’ 3’-GACGTC-3’ Nsi I, 5’-ATGCAT-3’ 3’-TACGTA-3’ Nsi I 5’-ATGCAT-3’ 3’-TACGTA-5’ Pst I * PPT课件 DNA中的杂质如蛋白质、酚、氯仿、乙醇、SDS、EDTA等都会影响酶的活性。 1. DNA的纯度 影响限制性内切酶活性的因素 ①纯化DNA ②加大酶的用量 ③延长保温时间 ④ 扩大反应体积（ 20?l） 一般采取 * PPT课件 大肠杆菌一般有两种甲基化酶修饰质粒： 2. DNA的甲基化程度 dam甲基化酶（修饰GATC中的A）； dcm甲基化酶（修饰CCA/TGG的C）。 基因工程中必须使用甲基化酶失活突变的菌株。 * PPT课件 对不完全消化具有一定的影响 3. DNA的分子结构 * PPT课件 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 分子生物学实验Experiments of molecular biology 授课教师：田生礼 实验三 质粒DNA的酶切鉴定 * PPT课件 实验三