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细胞原代培养 一、组织块培养法 实验目的 原代培养方法之一：组织块法 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 设备与器材 设备 器械 试剂 材料 培养要点 一）材料新鲜 二）严格无菌操作 三）剔除脂肪等附着组织 四）组织块剪小（直径1mm），摆开放（间距5mm） 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 操作演示 处死 解剖 冲洗 剪碎 培养 观察 初学者易犯的错误 操作中不更换器械 冲洗次数不够 组织碎片太大 组织块摆放太密 培养液加入太多 初学者易犯的错误 操作中不更换器械 冲洗次数不够 组织碎片太大 组织块摆放太密 培养液加入太多 初学者易犯的错误 操作中不更换器械 冲洗次数不够 组织碎片太大 组织块摆放太密 培养液加入太多 初学者易犯的错误 操作中不更换器械 冲洗次数不够 组织碎片太大 组织块摆放太密 培养液加入太多 初学者易犯的错误 操作中不更换器械 冲洗次数不够 组织碎片太大 组织块摆放太密 培养液加入太多 二、消化培养法 实验目的 掌握消化法培养原代细胞的步骤 设备与器材 设备、器械、试剂、材料都与原代培养基本相同。 新需试剂有…… 设备与器材 培养要点 肝组织剪碎至1mm3左右。 合适的胰蛋白酶浓度（通常为0.25%） 合适的消化时间：消化时，待组织块变得较疏松，颜色暗白为止（通常为37°C 20~40分钟之间） 实验材料，前期步骤同细胞原代培养。 将剪碎的鼠肝脏组织进行消化…… 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 操作演示 准备 取材 剪碎冲洗 消化 过滤 离心 加培养液 计数 分装培养 观察 初学者易犯的错误 水浴锅未预热 组织块太大 胰蛋白酶消化 不足或过度 吹打用力过度 初学者易犯的错误 水浴锅未预热 组织块太大 胰蛋白酶消化 不足或过度 吹打用力过度 初学者易犯的错误 水浴锅未预热 组织块太大 胰蛋白酶消化 不足或过度 吹打用力过度 初学者易犯的错误 水浴锅未预热 组织块太大 胰蛋白酶消化 不足或过度 吹打用力过度 细胞传代培养 实验目的 细胞在原培养瓶内分离稀释后传到新培养瓶的操作叫传代。要获得稳定的细胞株或得到大量同种细胞，当培养细胞形成致密的单层后需要进行传代培养。 实验材料 演示操作 传代前准备 1.预热培养用液 2.用75%酒精擦拭双手和工作台面 3.摆放使用器械 4.点燃酒精灯 5.取出已预热的培养用液 6.从培养箱中取出细胞 7.各种器皿火焰消毒 演示操作 传代前准备 胰蛋白酶消化 1.加入消化液 2.显微镜下观察细胞 3.吸弃消化液，加入培养液 演示操作 传代前准备 胰蛋白酶消化 吹打分散细胞 1.吹打制悬 2.吸细胞悬液入离心管 3.平衡离心 4. 弃上清液，加入新培养液 演示操作 传代前准备 胰蛋白酶消化 吹打分散细胞 分装稀释细胞 1.分装 2.显微镜下观察细胞 演示操作 传代前准备 胰蛋白酶消化 吹打分散细胞 分装稀释细胞 继续培养 用酒精棉球