两种新地抑制素基因疫苗免疫大鼠地效果比较与作用机制分析.pdf

日lJ 吾 繁殖力是家畜重要的经济性：趺，受遗传、环境和内分泌激素等因素的影响。长期 以来，为了提高家畜的繁殖力，提高畜牧生产效益，畜牧科技工作者已从新品种培育、 激素、饲养管理和环境条件改善等方面进行了大量研究，使畜牧生产效率得到一定的 提高，但同时也带来畜产品质量和安全性等新问题，现有许多报道利用免疫学原理开 发提高繁殖力的新方法。 抑制素主要由卵巢颗粒细胞分泌的，在生理状况下可以选择性抑制FSH分泌。用 抑制素或其亚基主动或被动免疫绵羊、山羊、牛、猪、豚鼠等，产生的抗抑制索抗体 可以中和体内的抑制素，减小它对FSH的抑制作用，从而增加排卵率，提高繁殖力【l。3J。 本实验室自1983年以来，一直进行诱导黄牛和水牛孪生机理和孪生技术的研究。虽 然结合应用孕马血清促性腺激素及其抗体己成功诱导54％的妊娠母牛生双胎M]，由 于该技术成本较高，且操作麻烦，所以推广应用比较困难。1992年后，采用猪精液抑 制素进行主动免疫已诱导27％左右的母牛生双胎[901l，但由于免疫原来源有限，免疫 程序复杂，且抗原纯度不够，所以该法的推广应用受到限制。自1995年采用两种方 案，一种是以母鸡作生物反应器，用少量抗原制备大量抗抑制素抗体，经小鼠、大鼠、 去势公羊的内分泌、子宫增重确定其有生物活性后，对母牛作被动免疫，发现免疫组 n亚基部分肽段对应的基因序列克隆进真核表达载体，提取抑制素质粒DNA对母牛 进行基因免疫研究[1“，本实验室正从事这方面的研究。 基因免疫又称DNA免疫，是利用基因重组技术，把编码抗原的外源基因引入载 体(如质粒等)，构建重组体DNA，免疫动物机体，通过宿主细胞的转录系统，表达 抗原蛋白，经抗原递呈激活免疫系统，从而诱导机体产生特异性免疫应答。这种用于 发展起来的免疫学新技术，DNA疫苗有“第三代”疫苗之称，具有制备简单，不需 要蛋白质的合成、提取与纯化，免疫效票维持时间长，疫苗稳定性好，易保存等特点， 篇，其中绝大部分是医学和兽医学中关于传染病和肿瘤防治的基因疫苗研究，如HIV、 疱疹、流感、狂犬病、乙型肝炎、脑炎病毒、SARS、禽流感和猪口蹄疫病毒疫苗等 等，也有与生殖相关的基因疫苗(如兔透明带蛋白基因疫苗、hCG。基因疫苗以及本 实验室姜勋平、茆达干博士等研究的抑制素基因疫苗等)，但这些抑制素基因疫苗都 V 硕士论文两种新的抑制素基因疫苗免疫大鼠的效果比较及作用机制分析 素与乙肝表面抗原S基因的融合表达质粒，并且应用于免疫大鼠，得到含双拷贝生长 抑素的质粒免疫反应性明显优于单拷贝生长抑素的质粒。由此可以推想利用双拷贝抑 制素的质粒，形成两拷贝的抑制素表位，有望获得更好的免疫原性。 本研究所采用的两种新的抑制素基因疫苗是本实验室以前构建的7种重组质粒之 (FIBsAg)基因融合到真核表达质粒的抑制素基因疫苗。本研究根据实验室研究工作 总体安排，通过分析免疫原种类、免疫剂量、免疫次数对免疫应答、卵泡发育和生殖 内分泌激素水平的影响，旨在比较这两种抑制素基因疫苗的效果，探讨抑制素基因免 疫的作用机制，以获得经济有效的抑制素基因免疫方法和疫菌，为开发提高繁殖力、 提高畜牧生产效率的新技术奠定基础。 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下．独立进行研究工作所取得的 成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作 品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识 到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者(需亲笔)签名：研朝着力够年b,q为日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以 将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。 (请在以上方框内打“、／”) 学位论文作者(需亲笔)签名： 讲钢声 如，年f月妒日 导师(需亲笔)签名： 硼f年J月孙日