蛋白质三维结构4.pptVIP

* 21345678910111213 * * 胶原螺旋只在胶原中发现，而在球状蛋白质没有。Pro在Pro羟化酶作用下完成 * * 一条肽链形成：α-角蛋白，肌球蛋白，原肌球蛋白 几条肽链形成：纤维蛋白 * 类似于回文结构 * * * * 但有的亚基由两条或多条多肽链组成，这些多肽链间多以二硫键相连 * 生物活性的丧失是蛋白质变性的主要特征，有时空间结构只有轻微的局部改变，而且这些变化并没有反映到其他理化的性质上时，生物活性就已经丧失。 理化性质：溶解度、粘度、扩散系数、光谱特性等。化学性质：化学反应，易被酶解性 * 蛋白质的一级结构决定其空间结构。蛋白质的天然空间结构一般是热力学上的自由能最低的状态。 * 而特定的空间结构是蛋白质具有生物活性的保证。 变性、失活(8M尿素+β硫基乙醇)。透析去除变性剂后，构象恢复，二硫键正确配对 * 除一级结构为决定因素外，蛋白质空间构象的正确形成还需要一类称为分子伴侣(chaperon)的蛋白质参与。分子伴侣通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象。分子伴侣广泛地存在于从细菌到人的生物体中，其中有很大一部分被称之为热休克蛋白（heat shock protein） * 蛋白质的折叠除了热力学作用外，还有动力学的作用。 * 蛋白质变性 (denaturation) 变性本质： 维持三维结构的次级键被破坏，空间结构发生改变，分子内部的有序紧密的结构变为无序而松散。但一级序列没有变化 变性特征： 生物活性丧失、一些侧链基基团的暴露、理化性质改变 天然蛋白质受环境变化或化学处理的影响，生物活性降低或完全丧失，理化性质发生改变的过程称为蛋白质的变性。 蛋白质变性(Protein Denaturation) 正常的蛋白质 变性的蛋白质 变性因素： 物理因素: 加热、紫外线、X-射线、超声波等 化学因素: 酸、碱、有机溶剂、蛋白变性剂 （尿素、 盐酸胍）、重金属盐等 应用： 变性灭菌、消毒；变性制食品等 可逆变性：蛋白质的变性作用不剧烈，当除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性——蛋白质复性(renaturation) 不可逆变性：当除去变性因素时，蛋白质的构象不能恢复原状，生物功能也不恢复 蛋白质变性的种类 牛胰核糖核酸酶A(Rnase A)为一单链蛋白，有124个AA残基，有4个链内二硫键 蛋白质的一级结构决定空间结构 变性失活，空间构象解体 (8M尿素+β硫基乙醇) → 透析后，空间构象恢复，二硫键正确配对 一级结构决定空间结构的证据 ——核糖核酸酶A变性复性实验 美国人安芬森(C.Anfinsen)于1961年发现变性的Rnase A能恢复活性，为氨基酸序列决定其空间结构提供直接证据，因此获得了1972年诺贝尔化学奖 4对二硫键正确配对,与未经处理的酶具有相同的溶解度,吸收光谱和相同的X-射线衍射图， 95-100%酶活性恢复 二硫键全部被还原，酶的空间结构破坏，肽链完全伸展，酶的催化活性完全丧失 天然状态，具催化活性 8个-SH随机重组的二硫键配对组合： 7×5×3 = 105 种 该实验证明：蛋白质的折叠不是随机的，多肽链中氨基酸序列含有形成空间结构的全部信息，即蛋白质一级结构决定空间结构。 研究表明：生物体内并不是所有的蛋白质都能自发的折叠，而需在分子伴侣、折叠酶等的帮助下才能正确折叠 体内蛋白质需在分子伴侣和折叠酶帮助下折叠 伴侣蛋白(chaperone) 热休克蛋白(heat shock protein, Hsp) Hsp70 family：DnaJ，DnaK 陪伴蛋白（chaperonin） Hsp60 family：GroEL 折叠酶 蛋白质二硫键异构酶（PDI） 肽酰脯氨酰顺反异构酶（PPI） DnaJ，DnaK GroEL 提供保护环境，促进肽链正确折叠 解聚错误折叠的肽段，并促使其重新折叠为正确的构象 蛋白质二硫键异构酶（PDI） 使二硫键从全反式转为全顺式结构，从而使蛋白质正确折叠成为有生物活性的结构 蛋白质的空间结构是由关键部位的氨基酸序列决定 蛋白质三维结构的研究方法 1.X-射线晶体衍射法测定晶体结构 可用于测定较大蛋白结构 蛋白晶体不易得到 2. 核磁共振（NMR）确定蛋白质分子 在溶液中的动态结构 用于测定较小蛋白结构（15 kDa） 蛋白质构象病（折叠病） 蛋白质构象病：蛋白质的折叠发生错误，构象发生改变，蛋白质的功能受到影响从而产生的疾病。 这类疾病包括：老年痴呆症、疯牛病、亨停顿舞蹈病等