毕业设计（论文）《板蓝根多糖提取工艺研究》.doc

1 引言 板蓝根（常用别名：靛青根、蓝靛根、大青根）是一种中药材。中国各地均产。板蓝根分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝（Isatis tinctoria L.）和草大青（I. indigotica Fort.）的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝（Baphicacanthus cusia Brem.）的根茎及根。具有清热解毒、凉血消肿、利咽之功效。在临床上用于预防病毒性感冒和治疗腮腺炎[1]。据报道，板蓝根多糖具有多种生物活性，对特异性免疫和非特异性免疫均有一定的促进作用，是一种比较理想的免疫增强剂[2-3]。在中国由于抗生素滥用，细菌整体的耐药率，要远远高于欧美国家约45%左右。合理的使用中药将有效减少抗生素的滥用。板蓝根是抗病毒中药的典型代表，在中国有两千多年的应用历史，临床效果良好，而体外抗病毒筛选也基本证实其确切疗效，首个获美国国立卫生研究院资助的中药研究项目。 1.1 多糖的提取方法 多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，广泛存在于动物、植物、和微生物细胞壁中，是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子。科学研究已经确认糖类物质具有许多生物活性，包括抗肿瘤、免疫、降血糖和抗病毒等，而且对机体几乎无毒副作用。中药多糖因具有增强机体免疫功能及抗肿瘤降血糖等药理作用，而且几乎没有毒性与副作用，因此引起国内外药理学家、生物学家和化学家们的关注。多糖是板蓝根的主要活性物质之一[4-6]。目前，多糖较常用的提取方法有：水提法、超声辅助提取法和酶提取法等。 1.1.1 水提法 用水作溶剂来提取多糖是最常用的方法之一，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。水提取的多糖多数是中性多糖。一般植物多糖提取多数采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去不溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，用高浓度乙醇沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。如李宏燕等人用100 g去核枣粉，加入250 mL适当体积分数的乙醇，45℃水浴回流脱脂两次，离心分离后枣渣加水共3500 mL，90℃水浴搅拌浸提8h，离心分离，合并所得多糖提取液；提取液45℃减压浓缩，浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，得粗多糖沉淀；粗多糖加水溶解后，氯仿、正丁醇脱蛋白，用NaOH溶液调节pH值至弱碱性，加0.4倍多糖液体积的H202，40℃水浴保温4h脱色；脱色液对蒸馏水透析24h，无水乙醇沉淀，离心分离，45℃真空干燥，得到大枣多糖。溶剂提取为常用的传统方法之一，有自身的优点。如不需特殊设备，成本低等，但此法往往提取效率低且费时，操作周期过长。因此，近年来，伴随着现代工业工程技术的迅猛发展，一些现代高新技术不断被应用到植物多糖的提取中。 1.1.2 超声提取法 超声波作为一种先进的提取方法，具有提取时间短、能耗低、效率高等特点，在生产中得到了广泛的应用。其主要原理就是超声波产生“空化作用”，这种空化作用能够产生局部的高温高压，并形成强大的冲击波或高速射流，这种强大的高速射流能够有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率。同时，高速射流对植物细胞组织产生一种物理剪切力，使之变形、破裂并释放出内含物，这就大大加速了萃取过程。另外，超声波的许多次级效应如热效应、溶化、扩散、击碎、化学效应、生物效应、凝聚效应等也能加速多糖成分在溶剂中的扩散释放，促进多糖与溶剂混合，有利于萃取。 1.1.3 酶提取法 酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件下分解植物组织，加速有效成分的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等非目的产物。此法可使后续的浓缩和脱蛋白工艺更简易、省时，粗多糖的纯度更高。但会提高生产成本，对提取条件要求较高。杨云采用的单酶法和复合酶法提取大枣多糖，单酶法提取多糖含量最高可达44.69%，而复合酶法多糖最高含量可达68.13%。 1.2 多糖含量的测定 本次试验采用苯酚—硫酸比色法测定板蓝根多糖的含量。苯酚—硫酸比色法测定多糖含量是由Dubois等［7］提出的。其原理是：多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长490nm处和一定浓度范围内，其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系[8]，从而可用比色法测定其含量。 本课题拟用超声波辅助提取法来分离提取板蓝根中的多糖，研究板蓝根多糖的提取工艺以及板蓝根多糖在体外的抑菌活性。 2 材料与方法 2.1 实验材料 2.1.1 实验仪器 表1 实验仪