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多重PCR HCV基因分型和临床关系探究 【摘要】目的：研究不同基因型丙型肝炎病毒感染 后丙肝患者的临床特征。方法：运用多重PCR (RT-PCR和 NESTED-PCR),使 la、lb、2a、2b 和 3o 在一管内扩增，对 93例血清HCVRNA21. 0X103拷贝/ml的标本，设计HCV的 C区特异性引物，采用Trizol浓缩RNA进行单管巢式PCR分 型，并对不同基因型患者的临床资料进行比较。结果： ①HCVlb在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中，分别为70% (14/20)、64. 06% (41/64)、71.43% (5/7), HCV2a 所占比 例分为 25%(5/20)、23. 44%(15/64)、14. 29%(1/7), HCVlb/2a 混合型所占比例分别为5% (1/20)、7.81% (5/64)、14. 29% (l/7)o ②在 ALT2150U/L 的患者中，HCVlb 占 54.84% (34/62), HCV2a 占 23.81% (5/21)。结论:HCVlb 在急性肝 炎、慢性肝炎、肝硬化患者中占绝对优势，HCVlb患者肝损 伤重于HCV2a患者。 【关键词】丙型肝炎病毒；基因型；多重PCR 【中图分类号】R450【文献标识码】A【文章编号】 1004-7484 (2012) 13-0109-02 HCV是一种全球性传染的、给人类建康带来极大威胁的 病原体。我们运用多重PCRHCV基因分型技术[1],对乐山 地区93例HCV RNA21. 0X103拷贝/ml的血清标本进行了基 因分型，探讨丙肝患者基因分型与感染途径的关系，了解不 同临床类型丙肝患者HCV基因型分布和频率。 1资料与方法 1. 1血清标本 93例我院2010年1月至2010年10月门诊及住院患者 抗-HCV阳性及HCVRNA阳性血清标本，年龄5-84岁，男67 例，女26例。阴性对照为HCV RNA阴性血清6例。 1.2试剂仪器 抗-HCV检测采用上海科华的ELISA检测试剂盒，酶标仪 为BI0-RAD 680,基因扩增仪为DA 7600,荧光定量检测为 达安基因提供的配套试剂盒，其他试剂自备。 1. 3方法 先对血清标本进行抗-HCV 0D值的测定和荧光定量PCR 检测，93例均是阳性的血清参照文献［1］进行基因分型。 1.4统计学分析 样本均数以x _ ±S表示，均数、率比较采用u、x?检验。 2结果 不同临床类型丙型肝炎患者基因分布及比率见表lo可 见，HCVlb在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中中的百分 比远远高于其他基因型，说明丙肝患者主要感染HCVlbo HCVlb、HCV2a型丙肝患者临床资料比较见表2。HCV分 型与性别和年龄无密切关系。HCVlb患者ALT高水平比例明 显大于HCV2a患者，说明肝损伤重于HCV2a患者。不同型别 抗HCV 0D值在22的范围内检出率不等，HCV2a型明显高于 HCVlb 型。 3讨论 HCV是引起人类急慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原 之一 ［2］。HCV RNA基因分型目前常使用的检测方法较多，如 直接测序、LiPa、酶切法及引物特异性电泳法等，由于方法 学较为复杂［3-10］,因此该基因分型主要在较大的专科医院 开展，基层医院无法展开。我们将多重PCR引物特异性分型 方法运用到临床工作中，简单快速地对乐山地区93例丙肝 阳性血清进行了分型。研究表明，HCV分型与性别和年龄无 密切关系。HCV感染后其临床表现轻重与感染基因型有一定 关系。我们比较了 lb和2a患者的临床资料，HCVlb患者在 急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中占绝对优势，ALT高水 平比例明显大于HCV2a患者，说明肝损伤重于HCV2a患者。 不同型别抗HCV 0D值在$2的范围内检出率不等，HCV2a型 明显高于HCVlb型，这可能与HCVlb型病毒株免疫原性比 HCV2a型病毒株免疫原性低的缘故。由于HCV基因型与肝病 严重程度有着密切的关系，并且对抗病毒治疗产生很大影 响，因此，HCV基因分型可为HCV感染者的诊断和治疗提供 重要的科学依据［11］。通过临床资料，我们发现：手术和输 血是丙肝感染的重要途径，而频繁血透和静脉吸毒也是丙肝 感染的主要来源[12] o我们还发现了 lb/2a混合型感染3例, 其中2例为反复大量输注血制品，一例为多次血液透析导致。 这是由于HCV免疫原性低下，感染后诱发的免疫力低下，时 间短。不同型之间无交叉免疫保护，所以HCV可再次或混合 感染。正是由于HCV存在输血及非输血多种途径的感染，严 格规范手术及血透等创伤性医疗操作，器械及设备的严格消 毒就尤为重要。应加强对高危人群的预防监测，加强献血员 的病原学筛查，加强对疾病的宣传控制。 参考文献 庄辉?重视