第五章-工业微生物产生菌的分离筛选.pptVIP

取样及筛选 1、水池边红色附着物中红酵母的分离 2、公共浴室红色附着物中红酵母的分离 3、空气中红酵母的分离 4、果园土壤、汽车修理厂土壤中红酵母的分离 5、醪糟、葡萄汁中红酵母的分离 分离筛选用培养基 1、平板筛选培养基（20%?PDA）：马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂1.8%，自然pH，121℃灭菌30min； 2、富集培养基：马铃薯20%，葡萄糖2%，自然pH，121℃灭菌30min； 3、斜面保存培养基（20%?PDA）：马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂1.8%，自然pH，121℃灭菌30min； 4、液体种子培养基(YEPD)[9]：葡萄糖2%，酵母膏1%，蛋白胨1%，自然pH，121℃灭菌20min； 5、液体发酵培养基(YEPD)[9]：葡萄糖4%，酵母膏1%，蛋白胨1%，pH?6.0?，121℃灭菌20min； 6、鉴定用培养基[10]：5%麦芽汁培养基，12.5%豆芽汁培养基，尿素液体培养基，无碳培养基，无氮培养基，尿素液体培养基，Gorodkowa培养基，马铃薯块培养基。 红酵母的鉴定 参照Barentt?J?A?《Yeasts?characteristics?and?identifaction》[17]有选择性地对筛选所得酵母菌进行 形态特征（细胞形态、群体培养特征、子囊孢子的形成、假菌丝的形成和形态、掷孢子的形成） 生理生化特性（糖类发酵特性、碳源同化特性、氮源同化特性、耐高渗特性、脲酶试验特性、重氮基蓝B盐显色特性）鉴定。 第六节 极端环境微生物的分离筛选 一、极端环境微生物的采样、分离筛选 （一） 极端环境微生物选育主要流程 样品采集 富集培养 分离纯化 菌种鉴定 菌种改良 接种实验 效果明显菌 效果不明显菌 工业生产 菌种保藏 继续驯化 提取宏基因组 建立宏基因组文库 分析宏基因组文库 利用PCR或杂交筛选特定功能基因 筛选表达特定表型的基因 随机测序分析微生物生态 （二） 采集样品 不同的微生物到不同的环境中去取样 （三）采集样品的方法 （四）样品的富集培养 （五）菌株分离 1、嗜热好氧菌培养基 2、嗜热厌氧菌培养基 根据自己的需要，采用不同的方法：直接分离培养；带回培养；直接提取DNA 嗜热菌培养时注意哪些问题？液体或固体培养 嗜热菌与普通菌分离培养有什么不同？ 1、在固体平板分离培养时，由于水分的蒸发，而使平板培养容易发生皱裂。 2、液体培养基培养时，置于60℃培养，转速高于180rpm以上，蒸发和通氧均不会造成影响，而高于70℃时，蒸发成为突出问题。 二、极端微生物酶分子生物学研究 1、极端酶基因的克隆 2、极端酶基因表达系统的构建 1、分离纯化极端酶 2、测定目的蛋白的N和C端 3、根据氨基酸序列推导核苷酸序列，设计引物 4、通过PCR扩增基因 5、构建基因文库或cDNA文库 6、通过分子杂交或目的蛋白活性检测 研究极端微生物多样性及其应用的意义： 1、极端环境微生物的基因是构建遗传工程菌的资源宝库。 2、极端环境微生物的生态、结构、分类、代谢、遗传等均有别于普通微生物，使得极端环境微生物的活性物质具有普通微生物活性物质所不具备的特性。 3、为生物进化、生命起源的研究提供新的材料。 第七节 生物可降解塑料（PHA）菌株的分离筛选 一、生物可降解塑料概况 二、获得生物可降解塑料的微生物途径和菌株分离 方法 1、从自然界分离产生PHA的微生物 2、利用食品工厂活性污泥生产PHA 3、构建基因工程菌株合成生物可降解塑料 三、PHA合成机制和发酵特点 1、碳源 2、氮源 3、溶氧 4、pH、温度及无机元素 特殊菌类——环保降解菌的分离 1、自然界存在着大量废物及污染物，如多环芳烃（PAN）、有机染料和颜料、表面活性剂、农药、酚类和卤代烃等。在分离筛选这类物质的降解微生物时，通常采用以该物质为唯一碳源或氮源的培养基进行富集培养。 2、分离平板可采用该污染物为底物的鉴别培养基，通过水解圈和变色圈进一步提高筛选效率。采用该方法分离苯胺、DDT、甲基对硫磷（MP）、石油、甲胺磷等污染物都取得了良好的效果。 3、在筛选环保降解菌时要注意，某些有毒污染物由于本身对微生物的生长有抑制作用，如果直接在培养基中加人该物质连续富集培养，可能效果不佳。这时就需根据不同情况设计更合理的筛选模型。如在分离以氰化物为氮源的细菌时，把浸透了KCN溶液的滤纸放到平皿盖上，滤纸所产生的含CN蒸气逐渐渗入含无机盐的分离培养基，每天用新制备的浸湿KCN的滤纸更换，培养一段时间后，从平皿上长出的菌落中进行分离，便容易得到能分解氰化物的菌株。 复习题 1、名词解释 菌株分离 筛选 富集培养 PHA 2、菌株分离的步骤、方法 3、从土壤中采集样