RNA干扰下调MBP-1对骨肉瘤Saos-2细胞生物学影响.docVIP

基金项目：甘肃省自然科学研究基金计划一般项目，项目编号：1308RJZA152. RNA干扰下调MBP-1对骨肉瘤Saos-2细胞生物学影响 施鑫鹤1，耿晢2, 施星臣3，马克君1，朱宏文1，任雯1，周雅丽1　 ( 1兰州大学第二医院, 甘肃 兰州730030； 2兰州大学基础医学院生物化学及分子生物学研究所，甘肃 兰州730000； 3兰州第二人民医院骨科，甘肃兰州 730030) 【摘 要】 目的： 研究 MBP-1（C-myc promter binding protein 1，MBP-1） 基因下调对人骨肉瘤 Saos-2 细胞生长影响。方法： 实验分 3 组：正常对照组（未转染骨肉瘤细胞）、阴性对照组（转染错义序列组）和干扰组（转染MBP-1 shRNA组）。 设计1条针对 MBP-1 基因的小干扰RNA片段及1条阴性对照siRNA, 并构建入 pSIREN-retroQ 质粒。将构建的重组pSIREN-retroQ 质粒通过 Lipofectamine 2000 脂质体转染骨肉瘤 Saos-2 细胞，嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time RT-PCR和 western blot分别检测 MBP-1 表达。CCK-8 法对 MBP-1 表达下调后对骨肉瘤 Saos-2 细胞生长影响进行检测。 结果： 通过 PCR 扩增阳性克隆及测序，说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组 pSIREN-retroQ 质粒。通过嘌呤霉素筛选两周，说明已成功构建 MBP-1 干扰及阴性对照骨肉瘤 Saos-2 稳转株细胞。Real time RT-PCR 检测，干扰组 MBP-1 mRNA相对表达量与正常对照组相比都显著下调（P ＜0.05）。Western blot 检测 MBP-1蛋白表达，干扰组 MBP-1表达量与正常对照组相比也都显著下调。CCK-8 法检测结果表明，MBP-1干扰组细胞在 48 h、72 h 和 96 h 增殖能力比正常对照组都有显著的升高（P ＜0.05）。 结论： MBP-1 基因表达下降能明显促进骨肉瘤细胞 Saos-2 的生长，为骨肉瘤基因治疗提供了新靶点。 【关键词】骨肉瘤 Saos-2 细胞； RNA干扰； MBP-1； 细胞生长 Effects of RNAi of MBP-1 on proliferation of Saos-2 cell line Shi Xinhe1, Geng Zhe2, Shi Xinchen3, Ma Kejun1, Zhu Hongwen1, Ren Wen1, Zhou Yali1, （ 1Central laboratory of Lanzhou University second hospital, Lanzhou University, Lanzhou, Gansu Province, 730030, China; 2Institute of biochemistry and molecular biology, Lanzhou medical college, Lanzhou University, Lanzhou, Gansu Province, 730030, China; 3Department of Bone Surgery, the second people’s hospital of Lanzhou; Lanzhou, Gansu Province, 730030, China） 【Abstract】 Objective: To study the effects of c-myc promoter binding protein (MBP-1) gene on the proliferation in vitro in human Saos2 osteosarcoma cells. Methods: Cells divided into three groups：blank control group (untransfected cells)，negative group(cells transfected with missense sequence) and experimental group(cells transfected with MBP-1 shRNA)．One MBP-1 shRNA sequences and one negative control shRNA sequence were designed, synthesized and cloned into pSIREN-retroQ plasma. Then the recombinant plasmids were constru