Ddx5在胚胎干细胞及重编程中的功能研究-中国科技论文在线.PDF

第11卷 第3 期 Vol.11 No.3 2018 年 2 月 February 2018 Ddx5 在胚胎干细胞及重编程中的功能研究 郭菲菲，康 岚* （大连医科大学肿瘤干细胞研究院，辽宁大连 116044 ） 摘要：目的：研究Ddx5 在胚胎干细胞（embryonic stem cell ，ESC ）、诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cell ，iPSC ）中的作用以及在干细胞、重编程中对下游基因的选择性剪接作用。方法：PCR 检测Ddx5 在ESC 及其分化过程中的表达水平和在重编程过程中的基因表达变化；通过在ESC 中过表达和敲低Ddx5 ，检测其对 ESC 多能性的影响；在体细胞重编程中检测Ddx5 的过表达和敲低引起的效率变化，利用流式细胞术和碱性磷 酸酶（alkaline phosphatase ，AP ）染色检测重编程效率；最后利用PCR 检测，分析Ddx5 对下游基因的选择性 剪接方式的影响。结果：Ddx5 在ESC 中富集并随分化降低。在ESC 中过表达Ddx5 后，Nanog 、Eras 等多能 性基因表达上调，敲低则相反。Ddx5 在重编程过程中表达上调，其过表达促进重编程，敲低则明显抑制。Ddx5 过表达引起Cd44、Hras 等基因的选择性剪接变化。结论：Ddx5 在ESC 和重编程过程中都发挥着作用，Ddx5 过表达引起选择性剪接变化。 关键词：分子生物学；胚胎干细胞；重编程；Ddx5 ；Ddx17 ；选择性剪接 中图分类号：[R34] 文献标识码：A 文章编号：1674-2850(2018)03-0256-09 Function of Ddx5 in embryonic stem cells and reprogramming GUO Feifei, KANG Lan (Institute of Cancer Stem Cell , Dalian Medical University, Dalian , Liaoning 116044, China) Abstract: Objective: To investigate the roles of Ddx5 in embryonic stem cell (ESC) cell and induced pluripotent stem cell (iPSC) cell and study the functions of them in alternative splicing downstream genes in stem cells and reprogramming process. Methods: We used PCR to examine the mRNA level of Ddx5 in ESC and its differentiation process, and gene expression changes in reprogramming process. By overexpression or knockdown Ddx5 in ESC, we explored its role in ESC pluripotency effects. In addition, we examined the overexpression level of Ddx5 and investigated the efficiency effect of knockdown Ddx5 in somatic cell reprogramming by flo