棉花黄萎病菌鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白基因的功能分析.pdf

棉 花 学 报 Cotton Science 2019 袁31 2 冤院101―113 / 1002-7807.swhj f 棉花黄萎病菌鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白基因 的功能分析 宋雯 王春巧 俞燕 高峰* 黄家风* 河子大学农学院/ 新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用重点实验室袁新疆 河子832003 冤 摘要院揖目的铱明确棉花黄萎病菌中鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白 OAZ冤基因 冤的功能遥 揖方法铱以大丽轮枝菌 野生型菌株V592 的基因组DNA 和cDNA 为模板袁 对 基因全长进行克隆并测序遥 构建针对 基因的敲除载体和互补载体袁通过农杆菌介导的遗传转化筛 基因敲除菌株和和互补菌株遥以野生型 菌株V592 为对照袁对 基因敲除突变体和互补菌株的菌落生长速率尧产孢量尧微菌核产量及对棉花的 致病力进行测定曰 通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应测定致病相关的其他基因在 基因敲除突 变体中的表达量袁及亚精胺诱导条件下袁V592 菌株中 基因及致病相关的其他基因的相对表达量遥 揖结 果铱 从棉花黄萎病菌中克隆到 基因的全长为 1 006 bp 袁 具有2 个开放阅读框 Open reading frame 袁 ORF冤袁ORF2 编码的蛋白具有OAZ 所特有的ODC-AZ 保守结构域遥 与野生型菌株V592 和互补菌株相比袁 基因敲除突变体的菌落生长速率降低尧 微菌核产量及产孢量明显减少袁 对棉花的致病力下降袁 表明 基因与大丽轮枝菌分生孢子和微菌核的产生有关袁并参与大丽轮枝菌致病遥 在 基因敲除突变 体中袁 1尧 1尧 1尧 2 和 1 基因表达量显著上调曰V592 菌株经亚精胺诱导培养后袁 基因的表达量显著上调袁而上述5 个致病相关基因的表达量均明显下调袁表明 基因对其表达 具有负调控作用遥 揖结论铱 基因响应多胺水平改变袁 通过调控 1尧 1尧 1尧 2 尧 1 的表达影响大丽轮枝菌孢子产生尧微菌核形成和致病过程遥 关键词院大丽轮枝菌曰鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白基因 冤曰产孢曰微菌核曰致病力 * * Song Wen, Wang Chunqiao, Yu Yan, Gao Feng , Huang Jiafeng ( 832003 ) [Objective] To determine the function of ornithine decarboxylase antizyme gene ( ) in causing cotton wilt disease. [Method] The full length of gene was cloned and sequenced from strain V592 genomic DNA and cDN