感毒清口崩片防治呼吸道病毒感染药效儿及免疫机理分析.docx

成都中医药大学博士学位论文 成都中医药大学博士学位论文 4Y 1 087778 中文摘要 本论文在中医药理论指导下，结合长期临床实践和现代药理研究制成感毒清 口崩片。在完成感毒清制剂工艺路线、质量标准及急性毒理学研究的基础上，对 其相关主要药效和免疫作用机理进行实验研究。 目的： 观察感毒清对流感病毒FMl致小鼠病毒性肺炎的抗病毒及抗炎、解热、镇 痛作用；探讨感毒清对流感病毒FMl致小鼠病毒性肺炎的细胞免疫作用机理， 为进一步的临床研究提供理论和实验依据。 方法： 1．以小鼠经鼻吸入流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FMl)复制小鼠病毒性肺炎模 型，采用感毒清高、中、低剂量治疗5天，同时设立西药利巴韦林、中药莲花清 瘟阳性对照及正常空白对照。观察①死亡保护作用；②肺指数及肺指数抑制率； ③肺组织病理形态学改变；④胸腺及脾指数。2．采用2,4一二硝基苯酚致大鼠和内 毒素所致家兔发热模型，观察感毒清的体温变化；3．采用二甲苯所致小鼠耳廓 肿和胀蛋清所致大鼠足肿胀模型，计算肿胀度及肿胀抑制率：4．采用小鼠热刺 激致痛和小鼠化学刺激致痛模型，计算痛阈值；5．采用双抗夹心ELISA法，检测 流感病毒感染小鼠血清中细胞因子IFN-Y、IL．10含量：6，采用SABC免疫组织化 学法检测流感病毒感染小鼠肺组织石蜡切片中细胞因子TNF．a、ICAM．1、NF．KB P65的表达和脾脏T淋巴细胞亚群的影响。 结果： 1．主要药效研究结果 (1)感染病毒后14d内，小鼠死亡率明显下降，并呈一定量效关系。其中感毒 清高、中、低剂量组小鼠死亡率与模型组比较有显著性差异(PO．001或P0．05)。 (2)治疗组中感毒清高、中、低剂量组肺指数均显著低于病毒感染对照组 (P0．01)；与利巴韦林对照组比较无明显差异(P0．05)。(3)①感毒清高、中、 低剂量组与病毒感染模型组比较肺部大体病变均有不同程度的减轻；②光镜下感 毒清高、中、低剂量组较大改善或减轻较重的间质性肺炎病变，以高剂量组为显 著；对各组标本就其病变程度进行半定量分析。结果显示，感毒清治疗组和利巴 韦宁治疗组较病毒感染模型组病变明显减轻(Po．05)。(4)①感毒清高、中、 冀m 冀m 00 i Y 成都中医药大学博士学位论文 低剂量组及其他各实验组对小鼠感染流感病毒后脾指数无明显影响(PO．05)。 ②感毒清中、低剂量组、莲花清瘟组及利巴韦林组对流感病毒感染小鼠胸腺缩小 无明显改善(P0．05)；感毒清高剂量组较病毒感染模型组的胸腺指数明显增加 (P0．05)。(5)①注射内毒素家兔给药后1h～4h感毒清大剂量组兔体温升高受 到抑制并下降，与空白对照组相比有显著性差异(P0．01，PO．05)。感毒清中 剂量组兔体温在2h～3h内用药后体温下降也较空白对照组显著(P0．05)：②给 予高、中剂量感毒清组的2，4-二硝基苯酚致热大鼠体温明显抑制且迅速消退， 其中以中剂量组最为明显。(6)①二甲苯致小鼠耳肿胀程度明显降低，与正常空 白组相比有显著性差异(P0．05)。②感毒清各剂量组大鼠足趾注射蛋清后 30min～90min内脚趾肿胀程度受到明显抑制(P0．01，P0．05)。以感毒清高剂 量组60min最为明显，大鼠足肿胀度明显低于模型对照组(PO．001)。(3)①感 毒清高剂量组小鼠的热板测定痛阈值明显提高(P0．05)。至60min痛阈值则更 加明显提高(PO．01)。②感毒清高、中剂量组小鼠对O 9％冰醋酸诱发扭体反应 次数明显减少，扭体反应抑制率分别为11．63％、6．69％，与正常空白对照组相比， 有显著性差异(Po．05)。 2．免疫机理研究结果 (1)感毒清高、中、低剂量组及阳性药对照利巴韦林组和莲花清瘟组能使小鼠 血清ⅡN叫含量升高；与病毒感染模型组比较有非常显著性差异(PO．01)。(2) 感毒清高、中、低剂量组及阳性药对照利巴韦林组和莲花清瘟组能使小鼠血清 IL．10含量进一步升高，与病毒感染模型组比较有显著性差异(P0．01)。(3)通 过图像定量分析，与模型对照组比较，感毒清高剂量组、中剂量组能显著降低 FMl感染小鼠肺组织中TNF．Ⅱ含量，有统计学意义(P0．05)；感毒清低剂量组 对TNF．Ⅱ有一定的抑制趋势，但与模型对照组比较无统计学意义(PO．05)。(4) 模型对照组小鼠肺组织细胞浆及胞核内见分布均匀的大量棕色颗粒，且大多数己 进入细胞核。模型组NF．KBP65显著高于空白组(P0．01)；感毒清高、中、低 剂量组和利巴韦林、莲花清瘟组NF．KB p65的活化程度(棕色颗粒)明显少于模型 组(P0．01)。(5)病毒感染对照组CD4显著低于正常空白对照组(P0．001)， 而CDs显著高于正常空白对照组(Po．001)，CD4／CD8则明显低于正常空白