甘草药材中甘草酸含量变异的分子标记研究—rbcl trnl内含子 igs发和matk.docx

独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致 谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包含为获得北京中医药大学或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 签名：盘鱼拙 日期：翅：6 1＆ 关于论文使用授权的说明 本人完全了解北京中医药大学有关保留、使用学位论文的规 定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借 阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，也可以采用影印、缩 印或其他复制手段保存论文。 (保密的论文在解密后应遵守此规定) 签名：篮盈弛 导师签名： 日期： 摘要 摘要 甘草为豆科植物甘草(G6”椭妇“m切坫妇Fisdl)、胀果甘草(G缸?椭妇细蚀纽Bat)、 光果甘草(G6切，^切加胁．L)的干燥根及根茎，始载于神农本草经，列为上品。有调和 诸药、解毒、补虚、止咳润肺等多种功能，是一种重要的大宗药材。在世界范围内应用 广泛，遍及医药、食品加工、日化等行业。多年以来，商品甘草主要依靠野生资源提供， 随着甘草开发利用的不断深入，国内外对甘草的需求量逐年猛增。我国野生资源遭到了 严重的破坏，有的地方甚至面临枯竭，生态环境严重恶化。为了保护我国的甘草资源和 三北地区的生态环境，国务院子2000年6月发布了关于禁止采集和销售发菜制止滥挖 甘草和麻黄等有关问题的通知，明令制止对甘草的掠夺性采挖。 野生资源的日益匮乏以及甘草需求量的逐日猛增，使人工种植甘草日益受到人们的 重视。发展人工种植甘草，用人工种植甘草来替代野生甘草，是实现甘草资源可持续利 用最根本的有效措施。尽管人工种植甘草在很多关键技术上取得了突破性进展，但人工 甘草的甘草酸含量低以及农残超标等问题，严重影响着人工甘草取代野生甘草的进程． 要想从本质上提高栽培甘草的质量，必须加强甘草的优良品种选育工作。与常规的农作 物育种工作相比，甘草和其他药用植物一样，其品质改良和育种工作非常滞后．因此， 需要借鉴农作物培育优良品种的经验，调查甘草主要产区的适应性种群的种质特性，从 中选择甘草酸含量高、适应性好、抗病能力强的优良种质，同时加强对甘草属其他种的 研究，通过种『白J杂交等技术手段导入优良的基因。但是甘草从播种到自然开花年限比较 长(3～4年)，通过常规杂交育种选育良种比较费时。如果能够借助现代的分子标记等技 术手段，找到能反映甘草酸含量的分子标记，便可以克服上述困难，较快地反映一些重 要的经济性状。同时还可以加快育种的周期，因此，寻找和甘草酸含量相关的分子标记 对评价甘草药材的质量和甘草优良品种的选育具有非常重要的意义。 目前探讨基因和活性成分之间的相关性所选择的研究对象包括基因组和单个基因。 以基因组为研究对象，反映的是植物所有差异的总和，不能直接反映活性成分含量的变 异。而且活性成分含量的变异可能是由有限的遗传差异决定，基因组变异的聚类可能反 映不出其变化：而以单个基因如ma瞰基因、IbcL基因等为研究对象，可以间接的反映 活性成分含量的变异，因为基因的进化是同步的，maⅨ基因、lbcL基因在进化的同时， 与活性成分密切相关的基因也在进化。 并且已有报道在甘草不同个体之同maⅨ基因、出cL基因的序列存在差异，说明 matK基因、fbcL基因可以用于种内的研究。而仃nL内含子、IGS仃nb锄F基因间隔区) 属于非编码区，进化速度快，也可用于种内的研究，因此选择舭L基因、matK基因、 仃IlL内含子、IGs(劬I广tnlF基因间隔区)作为分子标记，试阻揭示与甘草酸含量密切相关 的分子标记，找到甘草酸含量与fbcL基因、tnlL内含子、IGs(恤lI劬F基因间隔区)、 matK基因之间的相关性，发现与活性成分的含量密切相关的分子标记，为探讨活性成 分含量变异的基因机制奠定基础。 本论文结论如下： 1．对同一生长条件下49个不同的甘草个体进行了甘草酸含量分析，发现不同的甘 草个体中甘草酸含量变异较大，因此依据甘草酸含量的高低分为高甘草酸含量组和低甘 草酸含量组。经统计分析，得出2组甘草的甘草酸含量达到了极显著的差异。 2．日本学者Y锄觚够i KondoK对甘草的lbcL基因进行研究，发现在甘草的不同居 群间存在A．T型和G．A型2种基因类型。本文得出这lO个不同的甘草个体的而cL基 因片段在序列上没有差异，且属于G-A型，因此该基因片段不能反映甘草酸含量的变异。 2 2 甘草药材中甘草酸含每变异的分子标记研究一rbcL、仇lL内含子、lGs和matK 但与Yamanasi Kondo K等报道的甘草的rbcL基因序列