HPLC法测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质.docVIP

PAGE PAGE 1 HPLC法测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质 　　[摘要]目的建立草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质测定方法。方法采用高效液相色谱法测定，色谱柱：HypersilBDSC6H5（4.6mm×250mm，5μm）；柱温：25℃；流动相：0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-乙腈（40∶60），流速：1.0mL/min；检测波长：283nm；进样量：20μL。结果草酸萘呋胺酯与杂质能完全分离，草酸萘呋胺酯最小检测限为3ng。结论该方法灵敏、专属，可用于草酸萘呋胺酯包衣微丸有关物质的检查。 　　[关键词]HPLC法；草酸萘呋胺酯；微丸；有关物质 　　[中图分类号]R927.2[文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2013）02（a）-0071-02 　　草酸萘呋胺酯是一种脑血管和外周血管扩张药[1]，临床上用于治疗脑动脉硬化、老年性痴呆、老年精神紊乱、脑功能不全及美尼尔氏综合征、间歇性跛行、糖尿病性脉管病、毛细血管炎及营养性溃疡、早期坏疽等疾病[2]。草酸萘呋胺酯在国外已上市剂型有胶囊剂和缓释片，国内暂无制剂上市。草酸萘呋胺酯包衣微丸为自制，因微丸具有粒度均匀、流动性好、在胃肠道分布面积大，生物利用度高等优势[3]，而且可以对其进行包衣，通过控制包衣衣膜种类或厚度等因素来控制药物的释放速度[4-6]，以达到缓控释目的。本文按照中华人民共和国药典二部附录药品质量标准分析方法验证指导原则要求[7]附录194-195，对该制剂进行有关物质测定方法学研究。 　　1仪器与试药 　　1.1仪器 　　LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津）；HypersilBDSC6H5色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）（大连依利特科学仪器有限公司）；HW色谱工作站（南京千谱软件有限公司）。 　　1.2试药 　　草酸萘呋胺酯对照品（广州贝氏制药有限公司，批号：041105，纯度：99.7%）；草酸萘呋胺酯包衣微丸（自制，批号：050223、050224、050225，含量：95%～105%）；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件 　　流动相：0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH4.0）-乙腈（40∶60）；检测波长：283nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：20μL。在上述色谱条件下理论板数按草酸萘呋胺酯峰计算应不低于1500。 　　2.2供试品溶液的制备 　　取草酸萘呋胺酯包衣微丸研细，精密称取适量（约相当于草酸萘呋胺酯0.1g），置100mL量瓶中，加流动相溶解，滤过，制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液。 　　2.3对照溶液的制备 　　精密量取供试品溶液1mL至50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液。 　　2.4对照品溶液的制备 　　精密称取草酸萘呋胺酯对照品0.1g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。 　　2.5辅料干扰试验 　　按处方量称取本品辅料适量，照供试品稀释方法同法配制成空白对照溶液，分别量取供试品溶液、对照品溶液、空白对照溶液名20μL注入色谱仪，结果表明辅料对草酸萘呋胺酯峰及有关物质峰无干扰。 　　2.6破坏性试验 　　分别取5份草酸萘呋胺酯包衣微丸，研细，精密称取适量（约相当于草酸萘呋胺酯0.1g），分置100mL量瓶中，分别做以下破坏试验：（1）碱破坏：加1mol/L的NaOH溶液10mL，放置12h，用1mol/L的HCl溶液调节pH值至中性，加流动相至刻度；（2）酸破坏：加1mol/L的HCl溶液10mL，放置12h，用1mol/L的NaOH溶液调节pH值至中性，加流动相至刻度；（3）高温破坏：于120℃烘箱中加热3h，放至室温，加流动相至刻度；（4）光破坏：于6500Lux条件下放置72h，加流动相至刻度；（5）氧化破坏：加入H2O2适量，放置12h，加流动相至刻度；取上述5种溶液分别进样20μL，记录色谱图，见图1。结果表明本品经碱、酸、高温、强光及氧化破坏后，产生的杂质能有效地与主成分峰完全分离，互不干扰。 　　2.7最小检测限 　　取对照品溶液，进行逐级稀释，取20μL注入液相色谱仪，根据信噪比（S/N=3），计算得出草酸萘呋胺酯的最小检测限为3ng。 　　2.8精密度试验 　　取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定草酸萘呋胺酯峰面积。结果，RSD=0.71%，说明方法精密度良好。 　　2.9重现性试验 　　取同批次（批号：050223）样品，按“2.10”项下方法操作，平行6份。结果RSD=0.83%，说明方法重现性良好。 　　2.10样品有关物质检查 　　取草酸萘呋胺酯包衣小丸三批（批号：050223、050224、050225），按项“2.2”、