对艾滋病检测技术发展趋势的研究.docx

对艾滋病检测技术发展趋势的研究 谷金林(曲靖市麒麟区疾控中心艾防科 云南曲靖655000) 【摘要】AIDS是全球严重的公共卫生问题。对该病的准确检测是防治其广泛 传播的重要手段。近年来，随着该领域不断创新和研究，AIDS检测技术的简易、 快速、灵敏性逐步提高，木文着重从免疫学、分子生物学、基因芯片、P24抗原 等方面对目前检测技术发展的趋势作一综述。 【关键词】艾滋病检测技术发展趋势 【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752 (2012) 20-0360-01 一、 人免疫缺陷病毒基因组结构和特点 AIDS病原体为免疫缺陷病毒(HIV),有HIV-1 HIV?2两类。属逆转录病 毒，基因组很复杂，含4个开放读码框架(ORF),分别具有gag、pol、env sor 等基因，翻译形成多种糖蛋白。HIV病毒颗粒呈球形，直径100?120nm,具72 个由gp41 gpl20组成的棘突,核心含P24、P17、P9、P7核衣壳蛋白⑴。 二、 免疫学检测方法 1?免疫吸附试验(ELISA) ELISA是最常用的初筛实验法[2],其1代试剂以病毒裂解物、部分纯 化的病毒抗原包被反应板。假阳性率较高。2代试剂以重组抗原、合成肽包被反 应板,特异性较好。3代试剂以双抗原夹心法检测抗体,敏感性进一步提高，可检 出IgM抗体，窗口期由10周缩至3?4周。但仍有假阳性发生。4代试剂把HIV 抗原和抗P24抗体同时包被反应板，窗口期缩短至2?3周，?且能检测抗原抗体, 降低血源筛查残余危险度。在早期诊断上优于3代试剂。但4代试剂存在抗原抗 体相互干扰的可能，是否影响免疫反应特异性，尚需临床实际检验：3]o 2.免疫印迹试验(WB) WB是最常用的HIV抗体确认方法。病毒裂解物、重组抗原、合成肽均 可做WB的抗原。其最早岀现的条带是P24或gpl60?通常认为WB灵敏度和特 异性较ELISA高。但其自身抗体或其他特异性反应干扰，约有2%的假阳性［4］ 或不确定结果，尤其在ELISA阳性标本中，不确定高达4%?20%,其原因需复查得 以明确。 3 ?分子生物学检测法 对HIV的核酸进检测是分子生物学方法的主要内容，定性用于HIV感染 的辅助诊断,定量用于监测HIV感染者病程进展和治疗效果。 HIV核酸定性检测 利用PCR技术可对急性感染期、抗体检测不确定患者进行辅助诊断或血 液筛查。另外，该技术对HIV阳性母亲产下婴儿的检测诊断意义巨大，检测出生 48h内婴儿敏感性达38%,检测出生14d内婴儿敏感性达93%［4］。但由于需开盖 取样电泳，其本身敏感性又高，“污染”会吋有发生，导致岀现假阳性。 HIV核酸定量检测 5.1逆转录PCR技术(RT-PCR)： 该技术可在2h内完成cDNA形成，多聚酶链式反应、扩增产物并变形 等过程，进而完成凝胶电泳或实时荧光检测。因此，该技术的多种改良方法支 持HIV快速临床诊断［5］。 5.2分支DNA信号扩大系统(bDNA)： 主要检测HIV?1型RNAo人工合成的DNA片段侧链上均可标记被激发 的标记物，可通过标记物与样品HIVRNA含量比例进行定量。由于bDNA的探针 覆盖整个基因组，还可检测HIV的部分变异株。bDNA不存在扩增物的交叉污染, 但灵敏度不及PCRo 5.3核酸序列依赖的扩增系统(NASBA)： 该技术将病毒RNA加入AMV逆转录酶、核酸酶H (RnaseH) T7RNA 聚合酶和引物进行扩增。无需热循环装置，适合对冻存血浆进行冋顾性分析。其 高效扩增的特性，使其可和多孔板酶介导的显像技术及荧光实时检测结合应用。 该法扩增产物交叉污染较少，但操作繁琐，不宜人批量处理，扩增退火温度较低, 易引起非特异性扩增。 5.4转录介导的扩增系统仃MA)： TMA技术利用了 MLV逆转录酶、T7RNA聚合酶，MLV逆转录酶同吋具 有逆转录酶、RNA酶活性，反应温度为41.5°Co 6 ?基因芯片检测技术 该技术是核酸分子杂交和PCR技术的结合，可直接对病原体进行检测。 通过对HIV基因组进行分析，将其高度保守序列视为鉴定指标，极大提高了诊断 的准确性o Hauser等⑹发现,DNA芯片技术对AIDS早期诊断意义重大；HIV PRT440 也广泛用于HIV?1病毒的测序、分型及多态性分析；相关报道也证实了该法应用 于HIV耐药性检测具有较好前景。 7. P24抗原检测 P24抗原是从血清中检出的HIV最早病原学标志。一般2?3周即可检 出，1?2个月进入抗原高峰期。由于抗体的中和作用，P24抗原逐渐减少至难以 检测水平，标志感染者进入无症状期。 如再升高，说明病毒始大量繁殖，免疫系统破坏，患者开始进入AIDS发作期。 综上所述，为提高AIDS防控效果,AIDS检测技术正朝着简洁、敏