湖南医药学院.doc

湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划 项　 目　 申　 报　 表 项目名称:侗药人头藤对大鼠脑缺血再灌注后的神经保护作用的实验研究 学校名称 湖南医药学院 学生姓名 学 号 专 业 性 别 入 学 年 份 蒋林奇 20143010927 临床 男 2014 杨贤英 20143010915 临床 女 2014 于梦婷 20143011001 临床 女 2014 陈勋 20143011022 临床 男 2014 指导教师 蔡世昌 郑钦方 职称 讲师 药师 项目所属 一级学科 临床医学 学生曾经参与科研的情况 在大一期间我们曾调查过同学的头发（卷发直发）。 指导教师承担科研课题情况 导师蔡世昌长期从事大鼠脑缺血及神经再生的研究，导师曾参与国自基金课题《脑缺血预处理对神经细胞保护作用及机制研究》，参与山东省科技厅科技攻关课题《脑缺血再灌注后神经细胞再生及凋亡逆转机制的研究》，其后又主持了省教育厅科研课题《SD大鼠脑缺血再灌注后再生神经元的形态观察及分泌GABA和ACH的实验研究》。参与参与省教育厅科研一项，参与省卫生厅科研项目一项；参与省教育厅教改课题一项；参与校级科研课题两项。主编省级教材1部，副主编省级教材2部，参编国家级教材一部，参编教参两部。先后以第一作者在各类杂志发表论文十余篇，其中被SCI收录1篇（通讯作者），CSCD收录2篇。 导师郑钦方主要从事中药、侗医药科研工作。获2014年中国民族医药科学技术奖发明奖3等奖（排名第二）1项，怀化市科技进步奖二等奖1项，参与七叶一枝花种苗快繁关键技术研究，血藤果植物雌激素提取分离与开发，血藤口服液的研发。 项目研究和实验的目的、内容和要解决的主要问题 目的 研究人头藤对大鼠脑缺血再灌注后的神经保护作用。 内容 1.药材提取 取人头藤，分别加10倍、8倍水煎煮2次，第1次2h、第2次1h，合并煎液，滤过，减压浓缩，加适量活性炭，滤过，冷冻干燥。使用时加适量注射用水，滤过，调节?PH?至?6.5～7.2，灌封，灭菌，即得。??? 2.分组 将清洁级SD大鼠分随机分为空白对照组，丹参组，假手术组，人头藤高中低组（80、40、20mg/kg）,每组12只。 3.建模 建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型（MCAO）。用处理过的尼龙线沿剪口从颈外动脉残端插入，经右侧颈总动脉（CCA）进入颈内动脉（ICA），以CCA分叉处计算进线深度为18.0±0.5mm，至大脑中动脉起始部，造成局灶性脑缺血状态。缺血2 h后进行再灌注, 再灌注时间30min、1h、2h、4h、6h、12h、24h、3d、7d。 4.模型的评定 ①运动障碍评分 实验后24h，采用5分制行为学评分标准给动物行为评分：行为正常为0分；右前爪不能完全伸展为1分；自发转圈或向右侧行进为2分；仅在受到刺激时行进为3分；对刺激无反应为4分。以评分在1-3之间的大鼠为实验对象。 ②脑梗死面积的测量 评分后断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，冠状位切成5片。第1刀在脑前极与视交叉连线中点处，第2刀在视交叉部位，第3刀在漏斗柄部位，第4刀在漏斗柄与后叶尾极之间。脑片置于2％TTC中染色，采用Image Pro plus 6.0图像分析软件处理并做统计，计算每张脑片的梗死面积和总面积，脑梗死面积比（％）＝脑片梗死总面积÷脑片总面积×100％。 5.脑含水量及抗氧化指标的测定　 ①再灌注2h后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，取右半脑，生理盐水冲洗，用滤纸轻吸脑表面的水分，将其放在已知质量的载玻片上，准确称取总湿质量，然后放入100℃烘箱中烘烤12h，准确称取总干质量，然后计算出脑干质量，按照公式脑组织含水量=［（总湿质量－载玻片质量）－（总干质量－载玻片质量）］÷（总湿质量－载玻片质量）×100％。 ②另取左半脑，按质量与体积比为1:9比例冰浴下4℃生理盐水制备成10％的脑组织匀浆。用超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）试剂盒及丙二醛（MDA）试剂盒来测试实验后大鼠SOD、GSH-PX的活性及MDA的含量。 6.数据统计采用SPSS13.0软件系统处理，统计实验数据以?x±s 表示，p0.05为差异具有统计学意义。 要解决的问题 1.建立稳定的SD大鼠MCAO模型； 2.评价人头藤对大鼠脑缺血再灌注后的神经保护作用。 国内外研究现状和发展动态 人头藤，又名黑老虎，别名冷饭团、 \t /_blank 臭饭团、酒饭团、过山龙藤、大钻、万丈红、透地连珠、紫根藤、外红消、红过山、钻骨风、大叶南五味。拉丁名Kadsura coccinea.木兰科，南五味子属。味辛、微苦，性温。具有行气止痛、散瘀通络的功效，主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、胃病及妇科病等