第十章-维生素的测定-2.pptVIP

根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有 （1）2，6-二氯靛酚法? （还原型VC） （2）2，4-二硝基苯肼法? （总VC） （3）碘酸法 （4）碘量法 （5）荧光分光光度法 2、试剂 ⑴ 1%草酸溶液：称取10g草酸，加水至1000mL； ⑵ 2%草酸溶液：称20g草酸，加水至1000mL； ⑶ 维生素C标准液：准确称20mgVC溶于1%草酸中，并稀释至100mL，吸5mL于50mL容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgVC； ⑷ 0.02% 2，6-二氯靛酚溶液：称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250mL，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。 标定一 吸标液（VC）5mL于三角瓶→加6%KI溶液0.5mL→加1% 淀粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。 计算： 抗坏血酸浓度（mg/mL）=（V1×0.088）/V2 V1 - 滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积（mL） V2 - 维生素C重量（g） 0.088 -1mL 0.001N KIO3标液≈维生素C的量（mg/mL） 标定二 吸5mL已知浓度V C标液 → 加5mL1%草酸 → 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点 计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T） T= （C × V1）/?V2 C - 维生素C的浓度（mg/mL） V1 -维生素C的体积（mL） V2 -消耗2，6-二氯靛酚的体积（mL） 样品测定 提取：称样50g→加2%草酸100mL→入捣碎机中处理→过滤→颜色若深可加白陶土 滴定：吸5mL样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色 计算： VC（mg/100g）=（V × T）/ W??× 100 V -消耗染料体积（mL） T -1mL染料所能氧化维生素C的毫克数 W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数 4、注意事项 ⑴ 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水； ⑵ 滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化的参考； ⑶ 样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，损失维生素C； (一) 2，6—二氯靛酚滴定法 1．原理 还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。 见课本 (二) 2，4—二硝基苯肼比色法 GB/T 5009.86—2003 《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸含量测定方法》第二法 (三)荧光法 GB/T 5009.86—2003 第一法 第十章 重点 维生素的分类。 各种维生素 的测定方法。 4.1.2　提取 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50mL水分2～3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用约100mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。 4.1.3　洗涤 用约50mL水洗分液漏斗中的乙醚层，用pH试纸检验直至水层不显碱性(最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加)。 水层 皂化瓶内混合物 分液漏斗1号 水洗 乙醚洗 振摇，静置，分层 水层 醚层 分液漏斗2号 振摇，静置，分层 醚层 水层 分液漏斗3号 振摇，静置，分层 醚层 分液漏斗1号 提取 振摇，静置，分层 分液漏斗1号 水洗 醚层 水层 KOH溶液洗 振摇，静置，分层 醚层 KOH溶液层 水洗 振摇，静置，分层 醚层 水层 振摇，静置，分层 水洗 醚层 水层 净化 分液漏斗醚层 乙醚洗涤 水浴蒸馏 减压抽干 乙醇定容（5mL)离心上机 无水硫酸钠 浓缩 4.2　高效液相色谱分析条件（推荐条件）　　预柱：ultrasphere ODS 5μm，4mm×4.5cm。　　分析柱：ultrasphere ODS 5μm，4.6mm×25cm。　　流动相：甲醇∶水＝98∶2。混匀。于临用前脱气。　　紫外检测器波长：300nm。量程0.02。　　进样量：20μL。　　流速：1.0mL/min。 4.3　标准曲线的制备4.3.1　维生素A和维生素E标准浓度的标定方法　　取维生素A和各维生素E标准液若干微升，分别稀释至3.00mL乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。 标准 加入标准的量S,ul 比吸光系数，Ecm1% 波长