免疫实验课件-五年制实验课 腹腔巨噬细胞吞噬试验（墨汁）.pptVIP

补体依赖的细胞毒试验（CDC） 实验原理： 细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)结合后，可激活补体活化的经典途径，引起细胞膜受损，细胞膜通透性改变，而使细胞外低渗的液体（水）进入细胞，使细胞胀大死亡。 * * 小鼠腹腔巨噬细胞 吞噬实验 单核细胞存在于外周血液中，巨噬细胞广泛分布在各种组织中，可以从腹腔渗出细胞、骨髓、脾脏、淋巴结、胸腺、肝脏以及肺等组织中分离获得。 正常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞约106，其中巨噬细胞占30%。如果给小鼠腹腔注射某种刺激物，可使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。 刺激物 浓度 注射剂量(ml) 细胞采取时间 （注射后天数） 获得细胞数量 （×106） 血清 原浓度 0.5-1 2-3 1-5 肉胨汤 10% 1-1.5 3-5 3-7 矿物油 原浓度 0.1-0.5 4-6 10-20 淀粉 2%-10% 1-1.5 3-5 2-5 明胶 2%-4% 0.5-1 3-5 3-7 试剂（每组）： 印度墨汁（5%） 1ml/室 1640培养液（5%FCS) 2ml/组 生理盐水 1瓶/组 分组：4人1组，一只小鼠/组 器材（每组）： 玻片（载玻片/盖玻片） 4片 1ml微量加样器 1支 1000 ul微量加样器 1支 200 ul微量加样器 1支 20 ul微量加样器 1支 tips 若干 1.5mlEP管 若干 剪刀、镊子、解剖盘 1套 显微镜 37度温箱 湿盒 实验前2天，给小鼠腹腔注射5％淀粉溶液１ml（已完成）。 颈椎脱臼处死小鼠，剪开小鼠腹部皮肤，用镊子提起腹膜，用剪刀剪开一小口，用1ml加样器向腹腔打入2ml培养液，反复冲洗腹腔，吸出腹腔液放入EP管中。 每组取2张载玻片，做标记。每张分别加两滴100ul腹腔液，其中一滴加5ul墨汁，置湿盒中，37度孵育1h。用生理盐水洗掉未贴壁细胞和墨汁，盖好盖玻片后，显微镜下观察，计数。 用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未吞噬墨汁的巨噬细胞数、吞噬了墨汁的巨噬细胞数，计算吞噬百分率。 吞噬百分率: 有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％ 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬 鸡红细胞试验 试剂（每组）： 2％鸡红细胞悬液 1ml Giemsa－Wright染液 1 EP管 生理盐水 1瓶 苦味酸 1瓶 分组：4人1组，一只小鼠/组 器材（每组） 1ml注射器 1个 玻片（载玻片/盖玻片） 4片 1ml微量加样器 1支 200ul微量加样器 1支 tips 若干 1.5mlEP管 2个 剪刀、镊子 1套 显微镜 温箱 实验前2天，给小鼠腹腔注射5％淀粉溶液１ml（已完成）。 用1毫升注射器给小鼠腹腔注射3％鸡红细胞悬液0.5ml，用苦味酸做好标记后放回笼中；60min后脱颈椎处死小鼠。 剪开小鼠腹部皮肤，用镊子提起腹膜，用剪刀剪开一小口，用1ml加样器向腹腔打入2ml生理盐水，吸出腹腔液放入EP管中。 用20ul加样器吸取20ul腹腔液滴到载玻片上，再加入20ul Giemsa-wright染色液，上面盖好盖玻片后，显微镜下观察。 用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率及吞噬指数。 吞噬百分率: 有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％ 吞噬指数: 有吞噬作用的巨噬细胞吞入的鸡红细胞总数／ 100 抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC） 补体依赖的细胞毒试验（CDC） 细胞介导的细胞毒试验 NK细胞介导的细胞毒试验 抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC） ADCC反应是由多种不同效应细胞群介导的杀伤性效应机制之一。 NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞具有杀伤作用。 观察靶细胞被破坏的程度，用来判断它们的细胞毒性。 * *