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《生物制药》课程实验大纲 编 号：1300901 课程名称：生物技术制药 英文名称：Biological Pharmaceutical Technology 实验指导书名称：生物制药实验指导书 一、学时学分 总学时：32 学分：2 实验学时：8 二、实验目的 本课程实验的目的是使学生掌握生物技术制药中的基因工程制药、抗体制药、细胞工程制药、酶工程制药、微生物工程制药的基本原理、主要方法和技术，从而使学生能够将理性知识与感性认识有机地结合起来，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识以及分析问题和解决问题的能力。同时通过实验，培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力，实事求是，严肃认真的科学态度，以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。 三、实验基本原理 纯培养技术、无菌操作技术、分子生物学基本原理及技术、免疫学原理及技术、细胞工程原理及技术、蛋白质工程原理。 四、实验基本要求 在实验内容的安排上，注意使学生加深对生物制药工艺基本理论的理解。实验的难易程度适中，严谨全面。根据实验指导书完成课内实验任务，客观认真填写实验数据并进行结果分析、每次实验及时上交实验报告。 五、考核与报告 实验考核以平时实验预习报告、实验态度、实验操作及实验处理几部分组成，占该门课程成绩30％，实验报告按实验指导书提供的统一格式进行书写。 六、主要仪器设备 CO2培养箱、20W紫外灯、红灯、血球记数板、搅拌器、高速冷冻离心机、冷冻干燥箱、真空干燥箱、高压灭菌装置、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、液氮罐、精密天平、微量加样器、烤箱、细菌过滤器、10L气升式发酵罐、摇床、显微镜（带油镜）、紫外及可见光分光光度计、电泳仪、pH计等。 七、实验项目与内容提要 序号 实 验 名 称 内 容 提 要 每组人数 实验时数 实验要求 实验类别 备注 01 甲甲壳质、壳聚糖的制备 采用虾壳做原料，制备甲壳质和壳聚糖 3 4 选开 验证 02 液体深层发酵生产抗生素 学习微生物制药的液体深层发酵技术，掌握抗生素效价的检测及发酵产物的鉴定 3 4 选开 综合 03 抗生素的分离和鉴定（薄层层析法） 采用薄层层析法分离各种抗生素（如链霉素、卡那霉素等），以枯草芽孢杆菌作为生物显影菌株确定斑点位置，求得Rf值，进行鉴定。 3 4 必开 综合 04 植物细胞/组织培养与细胞活性鉴定 采用无菌操作的方法，培养植物愈伤组织（MS培养基），和采用液体悬浮培养的方法培养植物悬浮细胞，掌握鉴定细胞死活的方法。 3 4 选开 验证 八、适用专业 生物技术 九、实验地点 生物与食品工程学院实验室 实验一 甲壳质、壳聚糖的制备 【实验目的】 了解制备甲壳质、壳聚糖的工艺流程； 掌握甲壳质的提取、制备原理及壳聚糖的检测方法。 【实验原理】 甲壳质存在于甲壳类动物(如虾、蟹)的外壳，昆虫表皮，软体动物(如贝类、乌贼)的器官、菌类(如菇类、霉菌)的细胞壁。自然界每年合成量高达100亿吨，仅次于植物纤维素。甲壳质是1823年法国科学家Odier首次从蟹壳中提取出来的，由于甲壳质的性质非常稳定，溶解性很差，限制了它的应用。经一个多世纪世界各地科学家对它在结构上进行改良、修饰，并开发应用研究，它的衍生物壳聚糖在工业、农业、畜产、渔业、食品、化妆品及医药行业上得到广泛应用，尤其是近十多年来，壳聚糖的动物试验及临床观察得到科学家们的肯定，誉为人类第六生活要素(蛋白质、脂肪、维生素、矿物质和壳聚糖)。是一种功能性食品。 从虾壳提取甲壳质，工艺主要是将虾壳的成份分离，虾壳中含有无机盐(主要为碳酸钙)蛋白质和甲壳质。利用碳酸钙能溶于盐酸的机理，将其离析。蛋白质在碱性条件下能被水解生成短肽及氨基酸，它们能溶于水，与甲壳质分离。本实验首先采用盐酸浸泡虾壳除去钙质，接着利用氢氧化钠煮沸除去蛋白，之后水洗；用高锰酸钾与硝酸氧化脱色干燥得白色制品为甲壳质。 甲壳质在碱性条件下脱去乙酰基，生成聚胺糖。工业上很难100％脱去乙酰基，所以工业制得的实际上是甲壳质和聚葡胺糖两个结构单元的结合，称为壳聚糖。壳聚糖结构中有胺基(－NH2)，具碱性，因此，它能溶于很多酸，如硫酸、盐酸、胃酸等，可以用游离氨基含量的来检测乙酰基的脱去程度。 【仪器、材料与试剂】 1实验材料与试剂 虾壳； 3％~4%的氢氧化钠；50％的氢氧化钠；5％~6%的盐酸；5%的高锰酸钾；1%的硝酸；1mol/L的盐酸；0.1mol/L的氢氧化钠；溴酚兰指示剂。 2仪器设备 烧杯1000mL；三角瓶500mL；三角瓶100mL；大试管夹；水浴锅；烘箱；碱式滴定管；铁架台；磁力搅拌器；电炉等。 【实验步骤】 1虾壳处理：将虾壳洗净，粉碎，称重。 2甲壳质制备： 用5％~6%的盐酸于室温（20℃）浸泡虾壳24小时，不断搅拌。盐酸体积