养殖水体细菌总数测定荧光显微计数法.pdfVIP

ICS 65.150 B 50 备案号： DB32 DB32 DDBB3322 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 1730—2011 养殖水体细菌总数测定—荧光显微计数法 Fluorescence microscopy counting method was used to measure the count of aquaculture water bacteria 2011-04-15发布 2011-06-15实施 江苏省质量技术监督局 发布 DB32/T 1730—2011 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由江苏省海洋与渔业局提出。 本标准起草单位：江苏省淡水水产研究所。 本标准主要起草人：杨鸢劼、陈大鹏。 DB32/T 1730—2011 养殖水体细菌总数测定--荧光显微计数法 1 范围 本标准规定了荧光显微计数法测定养殖水体细菌总数的试剂、仪器设备、操作步骤、计数方法 和计算。 本标准适用于养殖水体细菌总数的测定，也适用于环境水域。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于 本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验、染色法、培养基和试剂 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 3 原理 细菌组织细胞经阳离子荧光探针--吖啶橙（AcridineOrange，AO）荧光色素染色后，以嵌入或 静电吸引与蛋白DNA/RNA相结合。在生物荧光显微镜高压汞灯发射光谱激发光下（200~600 nm），活 菌细胞和受损细胞（死细胞）分别产生黄绿色到绿色荧光和橙色到红色荧光。镜检计数待检样品中 活菌细胞和死菌细胞数，同时也可以计数总菌数。 4 试剂 所用试剂除特别说明外，药品均为分析纯(AR)。无菌水均为经0.2 μm滤膜过滤的双蒸去离子 水，符合Ⅰ级水的规格。 4.1 甲醛溶液(40%) 萘啶酮酸 萘啶酮酸 4.2 萘萘啶啶酮酮酸酸溶液（0.002%） 萘啶酮酸（C H NO） 0.002 g 12 12 2 3 无菌水 100 mL 待萘啶酮酸充分溶解后，经0.2 μm滤膜过滤灭菌，置灭菌试剂瓶室温保存。 酵母膏 酵母膏 4.3 酵酵母母膏膏溶液（0.025%） 酵母膏（生化试剂） 0.025 g 无菌水 100 mL 将酵母膏在无菌水中加热，充分溶解后，经0.2 μm滤膜过滤灭菌，置灭菌试剂瓶室温保存。 4.4 氢氧化钠溶液（4%） 氢氧化钠（NaOH） 4 g 无菌水 100 mL 1