人脂联素ACRP30基因的原核表达纯化及活性鉴定.doc

基金项目：河南省重大科技攻关项目（092102313110） 作者简介：梁晓艳，女，郑州大学生物工程系研究生。 *通讯作者：王云龙，E-mail： biowyl@126.com 人脂联素基因的原核表达、纯化及ELISA检测方法的建立 王云龙1,2,*梁晓艳1刘伟1李玉林2贾丽锋1李兆学3李忠信3 （1郑州大学 郑州450002 2 河南省生物工程技术研究中心 郑州450002 3 河南工业大学 郑州 450002） 摘要：目的 克隆人脂联素（adiponectin/Acrp30）基因，获得有活性的人脂联素蛋白，为进一步开发应用奠定基础。方法 以人新鲜皮下脂肪组织为材料，通过RT-PCR得到人Acrp30基因的全长片段。构建重组质粒pET-CKS/Acrp30，转化表达菌Balgold，并对转化子进行诱导表达，利用Ni-NTA 亲和层析纯化目的产物，蛋白印记验证其活性。结果 获得了人Acrp30基因全长片段的正确序列，表达和纯化了人脂联素蛋白，表达量占菌体总蛋白的35%，纯度达到97%。方阵滴定法确定了抗血清最佳稀释度(1600倍)和包被抗原的最佳工作浓度(1mg/L)。结论 人脂联素基因在原核表达载体的表达产物具有免疫活性。初步优化了间接ELISA检测条件。 关键词：人脂联素；包涵体；基因表达；酶联免疫 Prokaryotic Expression,Purification