大鼠α平滑肌肌动蛋白α-SMA酶联免疫检测.DOC

PAGE PAGE 1 AMEKO TEL:+86-021557585281 FAX:+86-021 E-mail:lianshuobio@163.com 大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 AE91352TRa 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用 途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）测定。 工作原理 本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）水平。向预先包被了大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA），温育；温育后，加入生物素标记的抗E抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）的浓度呈正相关。 试剂盒组成 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品3200pg/ml 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 链霉亲和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 生物素标记的抗E抗体 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 需要而未提供的试剂和器材 37℃恒温箱。 标准规格酶标仪。 精密移液器及一次性吸头 蒸馏水， 一次性试管 吸水纸 注意事项 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 操作程序 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。) 1600pg/ml 5号标准品 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液 800pg/ml 4号标准品 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液 400pg/ml 3号标准品 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液 200pg/ml 2号标准品 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液 100pg/ml 1号标准品 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗α-SMA抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂AB和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗α-SMA抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 显色：每孔先加入显色剂A