心脑通络液对实验性动脉粥样硬化大鼠模型Bc12表达的影响.docxVIP

心脑通络液对实验性动脉粥样硬化大鼠模型Bcl-2表达的影 黑龙江屮医药大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150040 摘要：目的：在建立腹主动脉粥样硬化大鼠模型基础上，通过动物实验，探讨心 脑通络液对动脉粥样硬化大鼠病变腹主动脉Bcl-2表达的影响，为治疗动脉粥样 硬化的临床用药提供实验依据。方法：选取健康雄性大鼠40只，动物随机分为 5组，即空白组、模型组、阿托伐他汀组、心脑通络液低剂量组、心脑通络液高 剂量组。参照文献，采用高脂饲料饲养结合球囊损伤腹主动脉内膜制备动脉粥样 硬化模型，连续喂养4周并结合球囊损伤腹主动脉内膜后，继续给药10周，末 次给药后24小时，动物处死，取材。观察心脑通络液对动脉粥样硬化大鼠病变 腹主动脉Bcl-2表达的影响?结果：1 ?腹主动脉粥样硬化大鼠模型复制成功；2.心 脑通络液可増强动脉粥样硬化大鼠腹主动脉细胞Bcl-2表达；结论：心脑通络液 可増强动脉粥样硬化大鼠腹主动脉细胞Bcl-2表达，起到抗凋亡作用。 关键词：心脑通络液；动脉粥样硬化AS 大量研究证明，动脉壁内皮损伤及脂质的沉积是口前公认的AS始动因 素[1],血液中的脂质在内皮下沉积。随后单核细胞黏附在内皮细胞损伤处进入 内皮下，吞噬脂质成为泡沫细胞，形成脂肪斑。血小板也逐渐聚集并黏附于内皮 的损伤处。吞噬细胞、内皮细胞及黏附于内皮细胞损伤处的血小板释放生长因子 刺激平滑肌细胞进入内膜，增生并合成胶原纤维，脂肪斑演变成纤维斑块。随着 这一过程的发展，脂质不断沉积，多种炎性细胞逐渐浸润，纤维帽渐渐变薄，慢 慢演变为不稳定斑块。以不稳定斑块的裂缝、糜烂或破裂为基础形成血栓，最终 导致严重心脑血管损害[2-4]o我们观察了心脑通络液对动脉粥样硬化大鼠病变腹 主动脉Bcl?2表达的影响，现报道如下。 1?实验材料 1.1实验动物：健康SD大鼠40只，雄性，体重1.5?2.0kg,由黑龙江 中医药大学实验动物中心提供。 1.2实验药物 1.2.1心脑通络液：由黃茂、地龙、桃仁红花、当归尾、赤芍、川苇、 太子参、水蛭、菟丝子等组成。有黑龙江中医药犬学附属第一医院制剂室提供。 122阿乐邙可托伐他汀钙片)：规格，10mg/片，北京红惠生物制药有 限公司。 1.3主要试剂：BCL?2试剂盒 武汉博士德生物工程有限公司 1.4主要仪器：酶标仪奥地利博塞ht2型、OLYMPUS光学显微镜日本 BX60、病理图像数码分析系统麦克奥迪实业集团Med6.0 实验方法 2.1分组、给药 SD随机分成5组：空白组、模型组、阿托伐他汀组、心脑通络液低剂 量组、心脑通络液高剂量组。除空白组喂普通基础饲料外，其余四组均喂高脂饲 料，连续喂养4周并结合球囊损伤腹主动脉内膜后。正常对照组和模型对照组均 给等体积蒸徭水；阿托伐他汀组予6mg/kg/d；心脑通络液高、低剂量组均给予 心脑通络液10.71ml/kg/d(低剂量组给药前将心脑通络液用蒸憾水按14稀释)， 继续给药10周，末次给药后24小吋，动物处死，取材。 2.2 Bcl-2免疫组织化学检测 在造模成功lw、2w、4w 8w四个吋间点，检测bcl-2,人鼠肌肉注射 速眠新(0.15mL/kg)麻醉后，取仰卧位，以腹主动脉病变部为中心进行组织取 材约lcm,步骤如下： 大鼠处死后，取腹主动脉血管组织标本，经4%多聚甲醛液固定, 石蜡包埋，切片，脱蜡至水； 3%H2O2室温静置lOmin,消除内源性过氧化物酶的活性； PBS液洗3次各5min； 抗原热修复，将切片浸入O.Olmmol/L枸椽酸钠缓冲溶液，微波炉 里加热至沸腾； 滴加50mu;l正常山羊血清封闭液,室温下孵育20min,甩去多 余液体； 滴加lota;抗50mu;l (I： 100比例稀释)，4°C冰箱过夜，阴性对 照不加lota;抗； 37°C复温45min, PBS液冲洗3次，滴加生物素标记II抗，室温 下孵育20min, PBS液冲洗; 滴加50mu;l链霉抗生物素蛋白■过氧化物酶溶液，室温下孵育 30min, PBS 冲洗 3 次; DAB显色lOmin,在显微镜下掌握染色程度，PBS冲洗； 苏木素复染2min,盐酸酒精分化，自来水冲洗； 脱水、透明、封片、镜检。 使用病理图像分析系统对免疫组化染色切片进行分析。在200倍镜下每 组随机取8张片，每张片4个视野，经显微镜摄像仪摄入，按512times;512像 素分布，并保存在病理图像分析系统内，用组化分析进行分析，先进行分割，选 择点状分割将阳性物标记为棕黄色，除去非特异染色，记录阳性目标总面积和统 计场总面积的比值(面密度)，进行统计学处理。 2.3统计学处理 数据用均数plusmn;标准差(plusmn;s)表示,运用SPSS 19.0统计软 件处理，各组间比较采用单因素方差分析，然后用Stud