真核生物转录及转录水平的调控.pptVIP

启动子-调控元件 基本转录调控因子-RNA聚合酶[基本转录机器]控制着基因的低水平表达，而特异（+/-）转录调控因子结合在特异（+/-）调控元件改变DNA构象（染色质重塑或核小体解聚）暴露出启动子区域并直接或间接通过中介蛋白复合体调控基本转录机器起始频率。 CTD磷酸化招募加帽、剪接机器和加尾机器来完成pre-mRNA加工。 3 端形成过程 poly(A)信号序列和与相关蛋白因子组成切割/多聚腺苷酸化的复合物来完成多聚苷酸化过程。分裂/多聚腺苷酸化特异因子(cleavage/polyadenylation specificity factor，CPSF)与加尾信号序列（AAUAAA）特异结合，切割刺激因子 (cleavage-stimulatory factor，CstF)与poly(A)位点下游富含G/U序列结合进一步加强了CPSF结合。切割因子 (cleavage factors，CF)将前体mRNA切断，随后和CPSF结合的poly(A) 聚合酶(poly(A) polymerase，PAP) 添加poly(A) 尾。poly(A) 结合蛋白（poly(A) binding protein, PABP）稳定poly(A) 尾。 引自Proudfoot等, cell, 2002 第一节 真核生物RNA聚合酶的分离、鉴定和功能 RNA聚合酶亚基分离鉴定（表位标签技术） 真核细胞的三种RNA聚合酶的一般性质 RNA聚合酶亚基组成（进化特征） 第二节 真核生物的启动子 １)RNA聚合酶I启动子及其转录起始 启动子可分两部分（-31/+6）称核心启动子（core promoter），其功能为决定转录起始的精确位置。 ? （-180/107，-100左右）称为上游控制序列（upstream control element，UCE,其功能为影响转录的频率。 ２)结合因子 a.上游结合因子(UBF):是一种特异DNA结合蛋白，可以与UCE结合，还可以与核心元件上游的一段序列结合。 b.选择因子（SL1）：为RNA聚合酶I转录所必须。4个亚基:TBP(TATA结合蛋白)和3个TAF1 ３)RNA聚合酶I的启动子及转录的起始 2.RNA聚合酶Ⅱ的启动子及转录起始 RNA聚合酶Ⅱ的启动子与增强子示意图 1）RNA聚合酶Ⅱ的启动子与增强子 第一个部位为帽子位点，即转录起始位点。其碱基大多为A。 第二个部位为TATA框（Hogness box）。它位于-25个bp其共有序列为：TATAA/TAA/T，基本上由AT碱基对所组成，只有很少启动子中有GC碱基对的存在。 第三个部位 为CAAT框。其共有序列为GGC/TCAATCT，一般位于-75（-100～-200）附近。虽然此序列名为CAAT框，但其中头两个G的重要性并不亚于CAAT部分。CAAT框为上游控制元件，为转录所需。 第四个部位是增强子（enhancer），又称远上游序列（far upstream sequence）。一般都在-1OO以上。 成环模型 滑动模型 3)RNA聚合酶Ⅱ的启动子及转录的起始 第3节 转录激活因子结构 真核生物转录因子的结构 转录激活域 DNA结合域 二聚体结构域 一、转录激活蛋白的两个功能区域 ?DNA结合结构域 1.锌指结构 2. HTH结构 3.亮氨酸拉链 C2H2锌指结构的特点 ①通过锌离子把四个氨基酸（2个组氨酸和2个半胱氨酸的协调作用）连在一起; ②锌指的一端与α-螺旋相连; ③锌指与DNA的结合是通过“锌指”的C端进行; ④每个“指”通过形成两个序列特异的DNA接触点（α-螺旋区域上含有保守的碱性氨基酸），负责与DNA的大沟结合。 ⑤锌指结构在RNA聚合酶Ⅲ转录因子TFⅢA中重复了9次，在转录因子SP1中也有三个拷贝。一般来说须要有三个或更多的C2H2型锌指才能与DNA结合。 C4锌指结构的特点 锌指结构是锌离子与4个半胱氨酸结合，它出现在一百多种类固醇激素受体转录因子中。 这些因子由同型或异型的二聚体组成，其中每一单体包含2个C4锌指结构。两个单体通过锌离子稳定折叠成更复杂的构象，再把每个单体的α-螺旋插入到DNA的连续大沟中，这与HLH蛋白类似。 2. HTH结构（helix-turn-helix） HTH结构(基序)的特点是两段α螺旋之间由一段常含脯氨酸的10氨基酸左右的肽连结，使两段α螺旋形成一个固定的角度。 3.亮氨酸拉链 亮氨酸拉链（leucine zipper）的肽链上每相隔七个残基就会有一个疏水的亮氨酸残基，这些残基位于DNA结合域的C端α-螺旋上; α-螺旋的侧面每两圈就会出现一个亮氨酸，形成一个疏水的表面