高中生物选修三：2.2 动物细胞工程.pptVIP

知识目标： 1.简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 2.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。 3.举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。 2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞培养：就是从动物机体中取出相关的组织，将他分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 1.动物细胞培养过程 制成悬浊液 胰蛋白酶处理 分散成单个细胞 取动物器官 和组织 剪碎组织 贴满瓶壁的 细胞用胰蛋 白酶处理分 散成单个细 胞制成细胞 悬浊液 放入二氧化碳 培养箱中培养 转入培养液中 进行传代培养 转入培养液中 进行原代培养 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 动物细胞生长特性： 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 相关概念： 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 无菌、无毒的环境。 2.动物细胞培养的条件 (1)无菌无毒的环境 —— 无菌处理；添加一定量的抗生素；定期更换培养液。 (2)营养 —— 添加血浆、血清天然成分。 (3)温度和pH —— 哺乳动物：36.5±0.5℃。多数细胞PH7.2～7.4。 (4)气体环境 —— O2：细胞代谢需要；CO2：维持培养液的PH；95﹪空气＋5﹪CO2 。 2.为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10﹪～20﹪的血清。 3.动物细胞培养技术的应用 (1)蛋白质生物制品的生产： 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体。 (2)健康细胞培养： 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植。 (3)判断物质的毒性： 检测有毒物质。 (4)用于其它生物工程： 基因工程。 (5)细胞的生理、药理、病理研究： 筛选抗癌药物。 细胞培养 加入物质 检查 人体正常 细胞培养 癌细胞 培养 有毒物质 致癌物质 抗癌药物 细胞的数目、形态 结构、生活状态 染色体的形态 结构、数目 细胞的数目、形态 结构、生活状态 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖