第二模块 功能微生物的筛选和选育实验五 培养基的配制与高压蒸汽灭菌.ppt

实验目的： 以产淀粉酶细菌的筛选和选育为目标，按照实际研究课题执行过程开展实验，通过培养基制备及灭菌、菌种的分离纯化、菌种的鉴定、培养条件的优化以及诱变育种等五个实验，完整地接受一次应用微生物课题研究的实训。要求学生通过实验，不但掌握相关的实验技术和方法，更要掌握如何应用这些技术去解决科学实验和生产实践中的具体问题，培养学生的创新思维和动手能力。 实验报告：提交整个模块实验的研究报告 参考文献： 陆伟宏, 徐莉, 戴亦军, 等. 一株烟酸羟基化菌株的筛选和鉴定. 微生物学报，2005, 45 ( 1 ):6-9. 陆伟宏, 王鑫, 徐莉, 等. 恶臭假单胞菌NA-1菌株烟酸羟基化酶活性的诱导和转化条件的研究. 微生物学报, 2005, 45 ( 4 ): 551-555. 1. 掌握配制微生物培养基的方法和注意事项； 2.掌握高压蒸汽灭菌和烘箱干热灭菌的原理、适应范围和操作技术 1. 全自动高压蒸汽灭菌釜，电子台秤，普通天平； 2. 玻璃平皿，玻璃试管，玻璃三角瓶，500ml玻璃烧杯，玻璃量筒，分装漏斗，玻棒； 3. pH试纸，牛角匙，废旧报纸，试管塞，三角瓶塞，棉花，纱布，纱绳； 4. 配制牛肉膏蛋白胨培养基，摇瓶发酵培养基相关的化学药品、试剂与原料、1N的NaOH和HCl 。 1.淀粉培养基的配制配方： 牛肉膏 3g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 5g/L，可溶性淀粉2g/L ,琼脂 25g/L(固定培养基)，pH7.0～7.2。 注：配制3000mL，分装20支液体试管（不超过试管高度的1/3）和20支固体斜面试管（不超过试管高度的1/3） ，其余固体培养基分装于三角瓶中，每瓶不超过其容积的2/3。 一、培养基的配制 2. 不同pH值（每种每组3瓶，每瓶10mL）配制1：淀粉3g/L，蛋白胨 10g/L，K2HPO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L pH 4.0 配制2：淀粉3g/L，蛋白胨 10g/L，K2HPO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L pH 7.2 3. 不同碳源（每种每组3瓶，每瓶10mL） 配制3：羧甲基纤维素钠3g/L，蛋白胨 10g/L，K2HPO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L pH 7.2配制4：葡萄糖3g/L，蛋白胨 10g/L，K2HPO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L pH 7.2 4. 不同氮源（每种每组3瓶，每瓶10mL） 配制5：硝酸钠10g/L，淀粉3g/L，K2HPO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L pH 7.2配制6：硫酸铵 10g/L，淀粉3g/L ，K2HPO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 1.5g/L pH 7.2 5.无菌水的准备 50ml三角瓶内盛入18ml蒸馏水，放入8～10颗玻璃小珠，加盖瓶塞，包扎待灭菌；准备每小组3瓶 50ml三角瓶内盛入18-20ml蒸馏水，加盖瓶塞，包扎待灭菌；准备每小组1瓶 二、灭菌材料与器皿的包扎 1.试管的包扎：7支试管为一包扎单位，用报纸将试管塞部分包扎严实并绳之以纱线； 2.三角瓶的包扎：用报纸将瓶塞部分包扎严密，并以纱线系之； 3.培养皿的包扎：5个平皿为一包扎单位，用报纸以滚筒方式将其包紧；每人扎一包 4. 1.5mL离心管的包扎 ：6个离心管为包扎单位，用报纸包成小包。每人扎一包 5.蓝枪头，黄枪头的包扎：20个为包扎单位，用报纸包成小包，每人一包。 固体斜面的摆放 注：斜面长度不超过试管长度的1/2 三、 培养基的灭菌 培养基使用湿热灭菌121 ℃ 20min，而玻璃器皿和器材则采用160℃ 3小时的干热灭菌，但是也可以进行湿热灭菌。 首先将含有培养基的三角瓶和试管放入灭菌锅，注意不要让培养基倾斜以防溢出，然后再放入其它的玻璃器材。灭菌物品之间不要摆放太挤，以保证高压蒸汽灭菌能够彻底 。 高压蒸汽灭菌注意事项 其过程是加热锅体夹层中的水至沸腾，当饱和蒸汽压达到1kg/cm2的时候，锅内温度即可达到121℃，在该温度下维持20-30分钟即可杀死包括细菌芽孢在内的所有微生物，达到彻底灭菌之目的。 如果灭菌釜内的空气外排不彻底，则压力表所指示的压力数值与锅内蒸汽温度不是标准的函数关系，实际温度会低于121℃，不能达到彻底灭菌的目的。因此灭菌釜内的空气是否排尽将直接影响到锅体内物品的灭菌效果 (演示）。 实验记录： 培养基种类和配方 培养基的灭菌 实验器材的准备和灭菌 1.为什么培养基需要调节pH值？而有的培养基则不需要调节pH,比如马铃薯葡萄糖培养基