微生物的实验室培养3幻灯片.ppt

1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量 缺点 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数 点此播放教学视频 （1）常用方法： 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大 约含有多少活菌。 （2）原理： 稀释涂布平板法。 2.间接计数法（活菌计数法） 点此播放教学视频 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 点此播放教学视频 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 [三]样品的稀释 点此播放教学视频 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 点此播放教学视频 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 微生物的培养与观察 点此播放教学视频 三.结果分析与评价 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 点此播放教学视频 三、课 题 延 伸 能分解尿素的细菌的鉴定 鉴定的原理： 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。 鉴定方法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。 点此播放教学视频 分解纤维素的微生物的分离 （一）纤维素与纤维素酶 纤维素：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。 纤维素酶：由微生物分泌的一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。 纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖苷 酶 葡萄糖 点此播放教学视频 刚果红染色法 刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 用加入刚果红的纤维素培养基去培养微生物时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈时，可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚 果红 染成红色的纤维素分解了。 点此播放教学视频 3.刚果红染色法分离：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。 点此播放教学视频 优点与不足 染色法 优点 缺点 方法一 方法二 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便不存在菌落混杂问题 1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈 2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 微生物的培养与应用 微生物包括哪五类： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 培养基可以分为哪几类？ 培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？ 获得纯净培养物的关键是什么？ 避免杂菌污染的方法包括哪四个方面？ 什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤？ 如何倒平板？ 一、培养基 二、无菌技术 点此播放教学视频 （1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、计数、鉴定菌落等。液体培养基常用于工业生产。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。