流式细胞术临床应用.docxVIP

流式细胞术的临床应用 一、在肿瘤学中的应用 这是FCM在临床医学屮应用最早的一个领域。首先需要把实体瘤组织解聚、分 散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化毗旋PI)染色后对细胞的DNA含量进行 分析，PI可以与细胞内DNA和RNA结合，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通 过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度宜接反映了细胞内DNA含 量的多少。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/G0期 具有二倍体细胞的DNA含量((2 N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量((4 N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此，通过流式细胞术PI 染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期齐时相区分为G1 / GO 期，S期和G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率，DNA含量直接 代表细胞的倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。 1、 发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断 人体正常组织发生癌变要经过一个出量变到质变的漫长过程，而癌前细胞即处于 量变过程中向癌细胞转化阶段。人体止常的体细胞均具有比较稳定的DNA二倍 体含量。当人体发生癌变或具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展过程屮 可伴随细胞DNA含量的杲常改变，FCM可精确定量DNA含量的改变，作为诊断 癌前病变发展至癌变屮的一个有价值的标志，能对癌前病变的性质及发展趋势作 出估价，冇助于癌变的早期诊断。冇资料证实，癌前病变的癌变发生率与细胞不 典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。随着细胞不典型增 生程度的加重，DNA非整倍体岀现率增高，这是癌变的一个重耍标志。 2、 在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用 FCM在肿瘤诊断屮的重要作用已经被认可，DNA非整倍体细胞峰的存在可为肿 瘤诊断提供冇力的依据，FCM分析病理细胞具冇速度快、信息量人，敏感度高 等优点，已被用在常规工作中。肿瘤细胞DNA倍体分析对病人预后的判断有重 要作用，异倍体肿瘤恶性病变的复发率高、转移率高、死广率也高，而二倍体及 近二倍体肿瘤的预后则较好。FCM不仅可对恶性肿瘤DNA含量进行分析，还可 根据化疗过程屮肿瘤DNA分布直方图的变化去评估疗效，了解细胞动力学变化, 对肿瘤化疗具冇重要的意义。临床医师可以根据细胞周期各时相的分布情况，依 据化疗药物对细胞动力学的干扰理论，设计最佳的治疗方案，从DNA直方图直 接地看到瘤细胞的杀伤变化，及时选用冇效的药物，对瘤细胞达到最大的杀伤效 果。 3、 FCM在细胞凋亡和多药耐药基因的研究屮的作用 研究如何用药物诱导癌细胞死亡。通过对细胞体积、光散射、DNA含量及特异 性抗原基因(如bcl?2, Fas等)测定分析出细胞凋亡情况。如可用Annexin V结合 PI或7- AAD双染色法进行细胞凋广分析。在凋广的早期阶段，胞浆膜磷脂的不 对称性丧失，导致膜内侧磷脂駄丝氨酸(PS)从细胞膜内层暴露于外层，从而可被 PS特界的Annexin- V探针所标记。PS转移到细胞膜外不是细胞凋亡特有的，也 口J发生在细胞坏死中。但在凋亡的早期细胞膜是完整的，而细胞坏死吋细胞膜的 完整性被破坏。由于碘化丙锭(PI)或7-AAD对细胞膜完整的活细胞和早期凋亡细 胞是拒染的，而对膜完整性被破坏的晚期凋广细胞或坏死细胞可以染色。因此， Annexin- V结合PI或7-AAD进行双染色可以用于检测活细胞、凋亡细胞和坏死 细胞。正常活细胞不会被染色，凋亡细胞可被标记上Annexing，坏死和凋亡晚 期细胞可被Annexirr V和PI或7- AAD同时染色。多跖耐跖是肿瘤病人化疗失 败的主要原因，FCM对多药耐药基因(MDR-l、P170等)和凋广抑制基因及凋广 活化基因表达的测定，可为临床治疗效果分析提供有力依据。 二、在临床细胞免疫中的作用 FCM提供了一种简捷地监测细胞亚群的方法。即通过荧光抗原和抗体检测技术 对淋巴细胞膜表而分化抗原(CD分子)、细胞分类和各亚群进行分析，并计算出 淋巴细胞各亚群的百分比，从而对人体细胞免疫状态进行评估。在某些病毒性疾 病的感染血液病、原发性和继发性免疫缺陷病、肿瘤的疗效观察和预后判断以及 器官移植的监测上起着重要的指导作用。 如止常人群淋巴细胞CD3+CD4+/CD3+CD8+比值大约为2 : 1,但在人体细胞 免疫力低下时可出现比例倒置。用FCM还可以监测肾移植后病人的肾排斥反应, 如果CD3+CD4+/CD3+CD8+比例倒置，病人预后良好，较少发生肾排异现象； 反之排异危险性增加。同样此种测定技术也用于爱滋病的诊断和治疗屮。 白细胞表面分化抗原的检测： CD3+： T淋巴细胞；CD45RA：未受刺激(Naive) T淋巴细胞；CD45RO：记 忆T淋巴细胞 CD3-CD19+： B淋