ABO正反定型不符患者血型的血清学及基因测序鉴定.docVIP

ABO正反定型不符患者血型的血清学及 基因测序鉴定（附1例报告） 张业翠吴鹏武文郭兴莹王艳青黄象艳 济南军区总医院 摘要： 目的对1例ABO正反定型不符患者血型进行血淸学及棊因测序鉴定。方法选择 1例标准血型血清学方法（微柱凝胶卡+全自动血型配血分析仪）鉴定结果为 ABO正反定型不符（正定型为0型，反定型为A型）患者，抽取其血液标本，采 用试管法做进一步的血清学鉴定，括正反定型复查、红细胞吸收放散试验;提 取血液基因组DNA，采用PCR法扩增ABO基因第6、7外显子并测序。结果试管 法血清学表现为ABO血型正反定型不一致，正定型未检测到A抗原和B抗原，反 定型血清中存在抗-B及弱的抗-A;红细胞做吸收放散试验检出A抗原，初定为A 亚型。测序结果与A101参考序列相比较，发现Axl3亚型940位碱基AG的亚型 决定性基因突变。结论木例患者ABO血型疑似A亚型，ABO基因型为Axl3/001，第 七外显子940位A〉G突变导致A抗原表达减弱。 关键词： ABO血型；Axl3亚型;基因测序;基因突变; 作者简介：黄象艳，E-mail :xiangyan73@aliyun. com 收稿日期：2017-04-30 Received： 2017-04-30 血型是指血液成分（包括红细胞、白细胞、血小板）表面的抗原类型，是血液屮 各种成分的遗传多态性标志，通常所说的血型是指红细胞膜上特异性抗原类型。 国际输血学会已经在人类中正式报告了属于36个血型系统的300多种红细胞抗 原Ul。ABO血型是临床输血医学中最重要的红细胞血型系统之一，涉及临床安 全输血、器官移植、医学遗传学等领域m。ABO血型系统除正常的A、B、0、AB 这4种血型外，还具有多个亚型，表现为抗原明显减弱或正反定型不一致。ABO 亚型的主要发生原因是ABO基因编码区的突变，包含点突变、缺失突变等U1。 对于常规血清学检测不能确定的血型，应该行ABO基因测序分型。本研究采用标 准血清学鉴定和ABO基因测序的方法鉴定1例血清学实验正反定型不符的疑难血 型标本，并分析Ax亚型的血清学特征和基因序列特征。现报告如下。 1资料与方法 1.1临床资料 患者男，34岁。体外受精术前采用标准血型血清学方法（微柱凝胶卡+全自动血 型配血分析仪）鉴定血型，结果为ABO正反定型不符（正定型为0型，反定型为 A型）。本研究己获我院医学伦理委员会批准。患者对本研究知情同意且己经签 署知情同意书。 ABO血型血清学鉴定方法 （1）试管法ABO正反定型取洁净小试管6只，标明抗-A、抗-B、AC、BC、0C、 自身C，标记有抗-A、抗-B字样的小试管分别加入抗A、抗B标准血清各1滴及 被检者5%三洗红细胞生理盐水悬液各1滴;标记有AC、BC、0C字样的小试管分 别加入相应的5%试剂ABO细胞各1滴及被检者血清各2滴，标记有自身C字样 的小试管加入被检者5%三洗红细胞牛.理盐水悬液1滴及血清2滴，以上各管均 充分混匀，放入血型血清学专用离心机以1 OOOXg离心15 s,判读结果。（2） 红细胞吸收和放散试验:取患者三洗压积红细胞1 m L,加等量单克隆抗-A试剂 混匀，置于4°C环境中吸收lh，然后用冷盐水洗涤8次，再加等量常温的生理 盐水混匀，放入56°C热放散10 min后离心取放散液。用低离子抗人球卡将放散 液与A试剂红细胞反应，并将最后一次离心洗涤后的上清液作为平行对照，孵 育离心观察结果。 ABO基因测序方法 抽取患者外周静脉血2 m L置于EDTA抗凝管中，使用TiANamp血液DNA提取试 剂盒，按步骤提取全血DNA，用外显子6、7扩增试剂盒和PCR法扩增ABO基因 外显子6和7，将PCR产物送上海生工生物工程公同进行直接测序。将测序结果 与红细胞基因序列数据库屮的ABO等位基因进行比对，确定亚型。 2结果 2.1血清学鉴定结果 试管法复查血型，室温条件下结果与微柱凝胶法结果一致。正定型患者红细胞与 抗-A、抗-B标准血清均无凝集;与抗-AB反应凝集强度为++;与抗H反应凝集强度 为++++;反定型患者血清与标准反定细胞AC、OC均无凝集，与BC凝集强度为++++, 自身对照为阴性。反定型放4°C 10 min后立即离心，结果显示血清中除检出有较 强的抗-B外，还检出弱的抗-A （凝集强度为+/-） ;4°C30 min后再次离心抗-A 凝集强度较前有所增强（凝集强度为++）。血清学格局呈现A亚型。吸收放散试 验放散液与A试剂红细胞呈阳性反应，最后一次离心洗涤后的上清液与A试剂红 细胞呈阴性反应。 2.2基因测序结果 外显子6存在261位缺失突变，为001型一般性特征性突变;外显子7出现第940 位A〉G突变，为Axl 3亚型决定性突变。结合外显子6和外显子7测序结果，确 定受检标本的基因型