中国红豆杉内生真菌产紫杉醇的定性分析 开题报告.docVIP

中国红豆杉内生真菌产紫杉醇的定性分析 开题报告 毕业设计开题报告 题 目 中国红豆杉内生真菌产紫杉醇的定性分析 学生姓名 专业班级 生物工程041 指导教师 2008年3月15日 题 目 中国红豆杉内生真菌产紫杉醇的定性分析 选题的目的及研究意义 紫杉醇是从短叶红豆杉树皮中分离得到的一种四萜化合物。它,能够有效地防止癌细胞分裂而促其死亡，特别是对卵巢癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、前列腺癌以及直肠癌等有特效，被誉为近十几年来天然药物研究领域最重大的发现，因此受到世界各国的重视。 二、综述与本课题相关领域的研究现状、发展趋势、研究方法及应用领域等 目前对于紫杉醇的生产，主要是从红豆杉的树皮中提取。红豆杉又名紫杉，全世界有23种1变种，分布于北半球的温带至热带地区，其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护。红豆杉的生长缓慢，资源缺乏，在红豆杉的不同部位紫杉醇的含量均很低，紫杉醇在植物树皮中的含量仅为0.01%，每提取kg,的紫杉醇就要砍剥1000-2000棵树的树皮.大量砍伐不但危及到自然界的生态平衡, 而且也会带来紫杉醇原料的枯竭。现阶段紫杉醇的非天然提取物主要从四方面途径来获得：（1）化学合成途径；（2）植物细胞与愈伤组织培养途径；（3）利用发根生产途径；（4）微生物发酵途径。其中微生物发酵途径是一条最具潜力的途径,该途径所用的微生物菌种主要是一些红豆杉的内生真菌。用该方法生产紫杉醇，是解决药源问题的有效途径。 利用红豆杉内生真菌生产紫杉醇的优点在于:易于大规模培养；能在简单培养基上进行生产；生产周期短；生产成本低等。但目前发现的菌株的产量均未达到工业化生产的要求――1mg/L以上。其关键问题在于内生真菌的分离筛选。如果再将现代微生物技术诱变育种以及基因工程技术与以上提及的方法相结合，一定会筛选培养出高产量的菌株，进行工业化生产，从而解决紫杉醇短缺的问题，同时起到保护生态环境，为人类的健康生长做出重大贡献。 所采用的方法微生物发酵的方法，从已分离到的20株红豆杉内生真菌中筛选出能够产生紫杉醇的内生真菌。为今后的菌种的改良和工业化生产一个良好的奠定基础。 从植物中寻找抗癌、抗肿瘤的天然活性物质，长期以来是新型药物研究的重要内容，植物内生真菌是天然药物的重要来源。在内生真菌产生紫杉醇的发现，也可以启发我们寻找能够产生其它抗癌药物的内生真菌。无论是从生态还是经济条件的角度来看，利用植物内生真菌作为药源是一项不会枯竭的资源，微生物发酵的方法具有以下优点：（1）微生物作为工业生产的源泉，可在发酵罐中进行，源源不尽的进行生产；（2）微生物发酵的方法容易实现工业化生产；（3）微生物发酵过程中，可以通过改善培养环境、改善工艺、改进技术来提高产量；（4）微生物易于通过基因工程等方法来改造生产菌株，从而提高紫杉醇的产量；（5）微生物发酵生产周期短，易于培养，应用的培养基相对比较便宜。植物内生真菌是一类应用前景广阔的资源微生物，用微生物发酵的方法生产紫杉醇，是解决药源问题的有效途径。 三、对本课题将要解决的主要问题及解决问题的思路与方法、拟采用的研究方法（技术路线）或设计（实验）方案进行说明 1 材料与方法 材料与设备 0. 材料 . 主要设备 振荡培养箱、FA1604型电子天平 . 培养基 母培养基马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，琼脂18.0g，水1000.0mL液体培养基： 马铃薯200.0g，葡萄糖40.0g，蛋白胨g, 酵母膏0.8g, (NH4) 2SO4 3.0g，KH2PO42.0g，MgSO4??7H2O0.5g，水1000。 1.2 方法菌活化 母株培养基，分装试管，于121.3灭菌30min，然后摆放斜面，冷却后接株，于28℃下活化培养5～10d，待菌丝长满斜面，放入4℃冰箱备用。 液体制备 制备液体培养基，分装于三角瓶中, 装量mL／00mL，于121.3℃灭菌20min，冷却后将活化菌株接入培养基中，接株量一接株铲，静置培养后转至摇床，在温度℃，转速为1r/min进行震荡培养，培养时间5～10d，后置于4℃冰箱中保存 ⑶ 提取紫杉醇 过滤发酵液,（℃），称量体积。取液于60 ℃旋转蒸发至1/ 10 体积后, 加入等体积的乙酸乙酯萃取, 收集乙酸乙酯相，放入研钵研，然后加入一定量的乙酸乙酯超声波提取, 收集乙酸乙酯相。合并乙酸乙酯相, 并于50 ℃旋转蒸发至干, 用少量醇溶解后4℃冰箱