细胞化学染色.PPT

1.原理(普鲁氏蓝反应) 4Fe3+ + K4[Fe(CN)6] Fe4[Fe(CN)6]3 +12K+ (亚铁氰化钾) (蓝色亚铁氰化铁) * （六）骨髓铁染色 稀盐酸 细胞外铁：主要存在于骨髓小粒的巨噬细胞中 细胞内铁：主要存在于有核红细胞中 2.试剂 （1）固定液：甲醇 （2）酸性亚铁氰化钾溶液：200g/L亚铁氰化钾5份，浓盐酸1份。取200g/L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓慢加入浓盐酸，边滴边摇由开始的白色沉淀消失为至。 （3）复染剂：0.5%沙黄 * 3.操作步骤 （1）选片做标记，甲醇固定10min （2）37℃滴加酸性亚铁氰化钾溶液染色30min （3）蒸馏水冲洗2min后沙黄复染1min，待干镜检。 * 4.注意事项 （1）所用的玻片及器具必须清洁，无铁污染。 （2）应选有骨髓小粒的髓片做铁染色，以便观察细胞外铁。 （3）作用液必须新鲜配制。 （4）亚铁氰化钾暴露于空气中，易氧化变质， 贮于棕色瓶中，避光密封保存。 * （5）复染前应充分冲洗，否则铁粒状结晶过多，影响观察。 （6）计数时要不停地旋转细螺旋器，因为铁粒在细胞内的高低度不一致，每看一个中、晚幼红细胞要旋转几次，直到看清为止。 （7）观察内铁时，幼红及淋巴细胞要分清，幼红细胞核为鲜红色，淋巴细胞核为淡红色， （8）与污染铁的鉴别：污染铁不在髓小粒和细胞内，而是浮在上边，而且蓝中带黑。 * 5.结果观察： （1）正常幼红细胞核呈鲜红、浆淡黄、铁颗粒呈蓝绿色 （2）低倍镜观察细胞外铁：涂片尾部和髓小粒附近 阴性：无蓝绿色铁粒。 阳性：含有不同程度的铁粒、铁小珠、铁小块。 根据阳性程度不同分四级。 * * 细胞外铁——幼红细胞外的骨髓铁 ( + ) 少量铁粒 偶见铁小珠 （2＋） 较多铁粒 较多铁小珠 (3+) 许多铁粒 许多铁小珠 少量小块状。 (4+) 极多的铁颗粒 铁小珠 许多小块密集 成堆。 细胞外铁观察阳性为蓝绿色沉淀 （3）细胞内铁：油镜计数100个中晚幼红细胞；并记 录含有蓝色颗粒的铁粒幼红细胞百分率。 Ⅰ型 胞浆内1-2个铁小粒 Ⅱ型 胞浆内3-5个铁小粒 Ⅲ型 胞浆内6-10个铁小粒或1-4粗大颗粒 Ⅳ型 含铁小粒10个以上或5个以上粗大颗粒 环形铁粒幼红细胞：含铁粒在6粒以上，其中2/3以上铁粒围绕核排列，超过1/2周。 * 骨髓细胞内铁染色 1.环形铁粒幼红细胞；2.铁粒幼红细胞 * 5.正常参考值 细胞外铁：+～++（2/3为+，1/3为++） 细胞内铁：20%～40%（正常人Ⅰ型多见，少数为Ⅱ型） * 7.临床意义： (1)缺铁性贫血:外铁↓或(－)，内铁 ＜15% 。 此方法是诊断IDA及指导铁剂治疗的一种辅助方 法；经铁剂治疗后细胞内外铁迅速增多。 (2)铁粒幼细胞性贫血：内铁阳性率高于40%，可达70%以上，铁粒数目增多，颗粒粗大，可见环铁；外铁多为+2，可达+3～+4。 （3）MDS-RAS：内铁阳性率↑，环铁＞15%。 * （4）感染性贫血：外铁↑，内铁↓ （5）地中海贫血：内铁↑，外铁↑ （6）巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再障、白 血病：外铁 、内铁正常或升高。 * 三、临床应用 * NAP分级 7.临床意义 增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。 降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组 * 8.鉴别诊断 慢粒与类白：前↓；后↑。 PNH与AA：前↓；后↑。 急粒与急淋：前↓；后↑。 MDS与慢性再障：前↓；后↑。 病毒感染与细菌感染：前者无明显变化，后者↑。 恶组与反应性组织细胞增多：前↓；后↑。 * （三）酯酶染色 概述 特异性酯酶染色 非特异性酯酶染色 概 述 根据各类细胞所含酯酶特异性高低分为特异性酯酶(SE)和非特异性酯酶(NSE)；特异性酯酶是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特异性酯酶根据水解基质液的PH不同，又分为中性NSE（α-醋酸萘酚酯酶 ），酸性NSE（酸性