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PAGE PAGE 1 利用SSR标记研究几个玉米改良系的类群划分 　　摘要：利用SSR标记从分子水平上对来源于先玉335杂交种、6WC×郑58和PH6WC×郑58×E003基础群的4个改良系以及13个国内骨干自交系，进行遗传关系类群划分。UPGMA聚类分析结果表明，17个自交系可划分4类群，第Ⅰ类群为Reid群，改良系J1207、J1401、8W131、J2067均属于Reid群，B73、6WC、掖478亦属此群；第Ⅱ类群包括两个亚群：丹340、8F1658属旅大红骨亚群，齐319、J666属PN亚群；第Ⅲ类群是No-Reid群，包括Mo17、B1M、4CV；第Ⅳ类群是塘四平头群，包括黄早四、昌7-2。 　　关键词：玉米；改良系；SSR标记；聚类分析 　　中图分类号：S513文献标识码：A文章编号：1674-0432（2013）-08-17-2 　　基金项目：吉林省科技发展计划项目 　　玉米育种主要利用杂种优势，玉米杂种优势群的准确划分和杂种优势模式的合理确立，是选育优良组合的前提[1]。通过种质扩增、改良和创新选育出的新自交系[2]，要进一步利用，就必须进行种质类群的划分。育种者对杂种优势类群和杂优模式采用多种方法进行过系统研究[3]，其中SSR标记技术是一种较为简单快捷的方法[4]。 　　本试验利用SSR分子标记技术对4个改良系（是对国外种质与国内种质在本地生态环境下的种质改良选育出的，其中J1207、J1401来自先玉335杂交种，8W131来自6WC×郑58基础群，J2067来自PH6WC×郑58×E003基础群）及13个国内骨干自交系进行遗传分析，估算遗传距离，划分杂种优势类群、预测杂种优势的可行性，为分子标记辅助育种提供理论依据，指导如何利用外引玉米材料选育改良优良自交系，组配强优势组合。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　试验选用的17份玉米自交系材料，其名称、来源及编号见表1。 　　1.2实验方法 　　1.2.1基因组DNA提取 　　玉米材料基因组DNA提取参照Rogers的CTAB提取法[5]。用紫外分光光度仪根据OD值测定DNA浓度，把DNA浓度统一调至10ng/L备用。 　　1.2.2SSR分析 　　SSR引物是选用分布于玉米10对染色体上的20对SSR引物，由上海生工合成。PCR总反应体系为20ul，包括说上下游引物各0.125ul，10×Buffer（含Mg2+）2ul，Tag酶0.2ul，4种dNTP共1.2ul，DNA模板2ul，不足部分由ddH2O补充。热循环反应过程包括：94℃模板DNA预变2min，1个循环；94℃模板DNA变性30sec，58℃引物与模板靶位点结合1min，72℃引物沿模板延伸1min，共35个循环；最后在72℃延伸5min，4℃保存。PCR扩增产物用6%变性聚丙烯酰胺凝胶在1×TBE缓冲液中电泳，80W恒功率2h，银染检测。 　　1.3数据统计分析 　　根据SSR扩增结果，在相同迁移位置有带记为1，无带记为0，缺失记为9，建立数据库。聚类距离按Nei和Li的方法[6]，计算自交系间的遗传相似系数（GS）和遗传距离（GD）。利用DPS统计软件[7]，采用类平均法（UPGMA）进行聚类分析，构建树状图。 　　2结果与分析 　　2.117份玉米自交系SSR标记遗传距离分析 　　20对SSR引物在17份米自交系间进行SSR检测，一共有16对引物扩增出了产物，扩增效果良好，如图1、图2。16对引物共检测出67个等位基因变异，每对引物检均能测出3～6个等位基因，平均为4.19个。根据SSR扩增结果得出的数据，计算17份玉米自交系间的遗传距离，遗传距离变化范围为0.196～0.747，平均值为0.69。其中，遗传距离最小的是郑58与改良系8W131，仅为0.196；其次为改良系J1207与6WC，遗传距离是0.235；第三为改良系J2067与郑58，遗传距离是0.298，第四为改良系J1401与6WC，遗传距离是0.301。 　　2.217份玉米自交系聚类分析 　　根据遗传距离矩阵，应用类平均法（UPGMA）方法，进行聚类分析，得到了17份玉米自交系的聚类分析图（图3）。 　　根据SSR聚类树形图，可看出，以遗传距离0.70为标准，可将17份玉米自交系划分4大类群： 　　第Ⅰ类群统称为Reid群，包括8个自交系，可细化为两个亚群：第一个亚群是以B73为代表的Reid群，6WC、J1207、J1401属于这个亚群；第二个亚群是以掖478为代表的改良Reid群，郑58、J2067、8W131属于这个亚群。 　　第Ⅱ类群有8个自交系，包括两个亚群：丹340、8F1658属于第一个亚群旅大红骨类群，齐319和J666属于第二个亚群PN类群。 　　第Ⅲ类群是