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运用普通光学显微镜和荧光显微镜鉴别五种金银花的花蕾
关键词 证明 普通光学显微镜 荧光显微镜 金银花品种 金银花
摘要 有关忍冬、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬五种忍冬科植物的花蕾因为其形态上有一定的相似容易被混淆,它们在不同的地区均被认为是“金银花”而入药。研究发现这五种植物在化学成分上有很大的不同,相应的,其药理作用与临床应用有所不同。在这个研究中,我们运用普通光学显微镜和荧光显微镜的这种常规技术来鉴别它们,这是一个简单有效的研究方法用来鉴别它们之间的差异。运用光学显微镜我们可以观察到他们详细的微观特征,比如腺毛和非腺毛,这样可以很容易区分除了华南忍冬的其他四种植物。荧光技术可以呈现不同的荧光分布,进一步确认包括华南忍冬的三个物种。这是第一个通过光学显微镜和荧光显微镜来鉴别这五种植物的报告。我们的这项工作表明运用光学显微镜和荧光显微镜的方法是强有力的鉴别这五种植物的方法。
介绍
金银花是忍冬科中重要的一个品种,其中忍冬、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬是五种在中国应用广泛的药用植物,有着超过2000年的临床用药经验,常用于急性发热、头痛、咽痛、呼吸道感染、疮疡和传染病(Qi et al.,2009;Qian et al.,2007)。药理研究报道,金银花在治疗在保肝、细胞保护、抗菌、抗氧化、抗癌和抗炎方面有着广泛的生物活性 (Chen et al.,2000;Chang and Hsu,1992;Lee et al.,2001,2010;Leungetal.,2006;Shi et al.,1999;Wang et al.,2009;Wanga et al.,2009;Yip et al.,2006;Yoo et al.,2008)。
由于其独特的功效,前一个俗称金银花的和后面四种像华南忍冬,分别列在中国药典委员会(2010年,国家药典委员会,中国)。然而,这五个品种可能会被混淆,它们因为形态上的相似在不同的地区被同样当做“金银花”来使用。事实上,寻求合理的分类和记录这五个五种的方法仍存在争议和讨论。大量的论文报道,这五种金银花被证明有很大不同的生理药理活性和临床应(Leungetal.,2006;LiuandLiu,1997;Liuetal.,1992;Shietal.,1999;Wangetal.,2009)。FLJ中环烯醚萜苷类和四羟黄酮类成分含量相当高但是咖啡酸和皂苷类成分含量很少。而FLw中皂苷有很高的含量。值得注意的是灰毡毛忍冬在这五种植物中的绿原酸含量是最高的(Li et al.,2002),据我们的初步研究表明灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬在皂苷含量上均有一定的不同。
为了确保这个草药的疗效性和安全性,防止一些未知的不利的影响,我们用这个简单而有效的方法来区分这五个物种。到目前为止我们可以运用很多方法来评估FL和FLJ的质量,比如高效液相色谱法(HPLC)、二极管阵列检测以及蒸发光散射检测是现在最常被用来分析不同品种的植物中成分的技术。可以通过色谱的方法比较指纹区峰值的大小。高效液相色谱与质谱用于分析化合物的结构信息具有高灵敏度、高选择性的优势,然而这些方法通常需要一定的时间,没有特异性并且需要特殊的分析仪器。此外,我们用于商业生产的质量标准是要高于化学家和分析师所制定的标准。相比之下,使用普通光学显微镜或者荧光显微镜直接观察是一个简单、经济和客观的方法。普通光学显微镜和荧光显微镜已经成功地应用于中药的鉴别和质量鉴定的(Anetal.,2009;Liangetal.,2006,2009;Xueetal.,2009)。作为一个稳定和可靠的技术,普通光学显微镜可鉴别植物详细的微观特性,荧光显微镜观察到某些植物组织吸收后的光的波长要短和更高的能量。在这项研究中,我们通过使用普通光学显微镜和荧光显微镜在微观上建立了鉴别忍冬、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬五种植物的方法。通过对比它们的微观显微特征和对其详细的介绍与描述可以有效地区别不同的植物。
材料和方法
方法
我们使用了包含上述五种植物的二十种忍冬科的样品进行试验,样品来自中国各个地区的道地药材,经过了刘慧娟教授(中国药科大学,南京,中国人民共和国)。其原始植物、样本数量、日期和每个来源的药材等细节信息都在表1中,对照标本是中国药科大学的生药学的标本馆。
表1
实验器材
佳能 E205
配备尼康数码相机DS-Fi1的尼康50I
c.尼康Nikon Eclipse Ti倒置显微镜
软件
实验使用图像软件NIS-Elements。
试剂
我们根据中华人民共和国药典(中国国家药典委员会,中国药典委员会2010版)中描述的制备程序制备了水合氯醛和稀释甘油液。
方法
五种金银花的表观形态特征。
通
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