免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较及常见问题分析 (2).pptVIP

流式细胞仪工作原理图 流式细胞术实验过程 细胞悬浮液制备（浓度为1～5×106个/ml） 细胞固定（合适的固定液，如4%甲醛溶液等） 细胞膜穿透（ 冰冷的甲醇等） 封闭（3%BSA-PBS等） 一抗孵育 荧光二抗孵育 流式细胞仪分析 人外周全血细胞双参数散点图 直方图：单参数分析 流式细胞术常见结果分析 散点图：多参数分析 常用细胞表型及意义： （Cluster of Differentiation, CD） CD3 总T细胞 CD4 T辅助/诱导细胞亚群 CD8 T抑制/细胞毒细胞亚群 CD19 B细胞抗原 LL: CD3-CD4- B细胞群+细胞毒T细胞亚群 LR：CD3+CD4- 细胞毒T细胞亚群 UR：CD3+CD4+ T辅助细胞亚群 UL 0.70 UR 24.2 LR 22.3 LL 52.80 荧光补偿示原理 荧光补偿是指修正荧光渗漏的过程，如从探测器出去除匹配荧光以外的任何荧光信号。 当采用两种或两种以上荧光标记时（如FITC,PE），当携带两种荧光素的细胞受到激光照射激发时，将发出两种不同波长的荧光。然而，荧光染料所发出的荧光都具有一定的波长范围（宽发射谱性质），虽然各自的荧光峰值不同，但发射谱范围会有一定的重叠。因而就会造成不同通道之间的荧光干扰，对实验结果造成影响。