生物分离10-电泳教学课件.pptx

;;;电泳的分类;;醋酸纤维素薄膜电泳;;凝胶电泳;琼脂糖凝胶电泳;;染色;;质粒电泳;聚丙烯酰胺凝胶电泳;;聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶； (3)对pH和温度变化较稳定； (4)几乎无吸附和电渗作用，只要纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；;;丙烯酰胺凝胶聚合原理;;丙烯酰胺的聚合;聚丙烯酰胺凝胶的一些相关概念;交联度;;聚丙烯酰胺凝胶电泳的连续性;不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳;2. 缓冲液离子成分的不连续性, （等速电泳） 体系中含三种离子。走在最前面的称为快离子或前导离子。走在最后的称为慢离子或尾随离子。;等速电泳 快离子和慢离子间形成一个稳定的迁移界面，形成三种离子移动界面，蛋白质离子夹在中间，被浓缩成一薄层。 ;;;;;SDS;SDS的主要影响因素;聚丙烯酰胺制胶;;等电聚焦电泳;;;pH梯度的形成;理想的载体两性电解质应具备的特征：;㈠没通电时的变化 所有的载体两性电解质分子都荷电，只是溶液中荷正电和荷负电的基团数目相等，净电荷为零。;;电解槽中，通电后，正负两极 会发生电 极反应： 正极端反应：6H2O→O2+4H3O++4e- 负极端反应：4H2O+4e-→2H2+4OH-;;;;;;;; 安马西亚商品名为Immobiline。它的结构式是： O H ︱ ︱ CH2 〓 CH — C — N— R (R代表羧基或第三氨基) Immobiline分子的一端是一个双键，可以在聚合过程中通过共价结合镶嵌到聚丙烯酰胺介质中。所以即使在电场中，也是“固相”的。; 在分子的另一端是一个缓冲基团R，R为弱酸或弱碱，它可以在聚合物中形成弱酸或弱碱的缓冲体系。 固相pH梯度与载体两性电解质pH梯度的区别在于前者的分子不是两性分子，在凝胶聚合时候便形成pH梯度，不随环境电场条件的改变而改变，后者是两性分子，在电场中迁移到自己的等电点后才形成pH梯度。固相pH梯度等电聚焦比传统等电聚焦具有更高的分辨率，更大的上样量，其分辨率可达到0.001pH，是目前分辨率最高的电泳方法之一。 ;等点聚焦电泳的应用 ;双向电泳（IEF PAGE和SDS PAGE）;毛细管电泳;毛细管电泳（CE）;;;;;CE中电渗流的影响;电渗流的流速;;HPCE中影响电渗流的因素;3. 电解质溶液性质的影响;;4. 温度的影响;5. 添加剂的影响;;毛细管的进样技术;;毛细管的检测技术;;;毛细管电泳模式-分类;一、毛细管区带电泳（CZE）;二、毛细管凝胶电泳（CGE）;缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 色谱与电泳分离 模式的结合。; 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液；毛细管内充有两性电解质，当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。;;;毛细管电泳的应用;自由流动电泳;自由流动电泳;特点;自由流动电泳技术基本原理;仪器组成;;;FEE的影响因素;;;;FEE操作分离模式;;;;;;;;