肥大细胞在间质性膀胱炎发病制中作用的研究.docx

天津医科人学博士学位论文中文摘要 天津医科人学博士学位论文 中文摘要 目的： 1．探讨问质性膀胱炎(IC)患者膀胱粘膜组织中肥大细胞数量、性质与分I 腔症状评分(PUF)联合应用存|、¨』质。陀膀胱炎诊断中的应用价值。 2．检测雌激素受体礼IC。Lt彳惦IJj晡lf』J英肥大细胞上的表达情砂●；怀㈨_rj『：激 素是否调控肥大细胞的激活从mol起肥大细胞脱颗粒，通过其所分泌的炎痱 子引起患者尿急、尿频、疼痛等临床症状。 3．通过转基因技术应用卵清蛋白表达系统，形成新的URO—OVA小鼠品系， 表达卵清蛋白为其膀胱上皮自身抗原。与先天性肥大细胞缺如小鼠(Kit”“讣鼠) 进行杂交繁殖，形成膀胱上皮表达卵清蛋白为自身并先天缺如肥大细胞的 URO—OVA／Kit卜91小鼠。小鼠注射卵清蛋白特异性T淋巴细胞后，使其膀胱出现炎 症反应，取其膀胱组织并与B6及URO OVA小鼠进行比较，明确肥大细胞存IC 中的作用和机制。 材料与方法： 具有尿急、尿频、膀胱充盈后耻骨上区疼痛表现的IC患者膀胱活检组织标 本18例，12例正常膀胱组织标本作为对照组。 1．膀胱组织标本分别应刚0．5uo甲苯胺蓝染色，光镜下计数肥大纠r JJl岜密度； 锇酸液固定标本，透射电镜观察肥大细胞与脱颗粒肥大细胞的超微结构；统计 学处理2组标本肥大细胞的浸润密度、肥大细胞脱颗粒比率与两组受试者PUF 评分的相关性。 2．0．5％甲苯胺蓝及透射电镜下观察肥大细胞与脱颗粒肥大细胞怖／1：叫Ira$以,Igr：61口- 构，并计算脱颗粒肥大细胞构成比；多克隆抗人雌激素受体抗体标识标术膀胱 黏膜上雌激素受体；统计学分析2组标本在肥大细胞数目、脱颗粒肥大细胞比 例及雌激素受体表达方面的差异。 3．形成转基因膀胱上皮．卵清蛋白(URO—OVA)小鼠。与先天性肥人细胞 缺如小鼠(Kit”蝌’小鼠)进行杂交繁钾f成URO—OVA／Kit” 1小鼠。汴射卵消蛋白 特异性T淋巴细胞后，耳义其膀胱组织并与B6及URO—OVA小鼠进行病理改变、肥 大细胞细胞因子等方面的比较及统计学分析。 天津医科人学博十!学位论文结果： 天津医科人学博十!学位论文 结果： 1．工C患者组PUF评分27．9±5．2分；『F常对照组3．8±2．2分。2组比较 差异有统计学意义(t=14．736，P0．01)。IC患者组肥大细胞数目为47—76个 ／mm2，平均28个／mm2；对照组为7一15个／mm!，平均10个／mm2。2组肥大细胞密 瞍比较差异有统计学意义(Z=x 927．K()．01)。I C纰膀胱粘膜肥大细胞浸涧数 奇}与瓮腔症状评分无线性棚关火系(r卜一0．(÷l 8，I，=()．6()1)。 2．IC组织标本中肥大细胞密度(5．59±3．40)个／HP，明显高于对照组 (2．48±2．23)个／HP，差异有统计学意义(t--2．787，P(0．01)；IC组织中75．3 ％的肥大细胞呈不同程度脱颗粒状态，对照组未见明显脱颗粒肥大细胞存在； 工C组织标本中ER+细胞(3．77±3．03)个／UP，对照组ER+细胞(0．88+0．76) 个／HP，两组比较差异有统计学意义(t=3．870 P(0．01)；肥大细胞与雌激素受 体阳性(ER．)细胞显著相关，相关系数为O．884(P0．01)。 3．静脉注射活化的OT．I小鼠CD8+T细胞之后URO—OVA小鼠在第7 天(分数，3)和14天(得分，2)可以清楚地看到明显的膀胱炎症表现。肥大 细胞数量增加2倍。而B6及UR0一ovA／Kit“咚“小鼠只有轻微膀胱炎症表现。相 关的肥大细胞所分泌的13种炎性因子分析，URO—OVA小鼠比UR0一ovA／K i t”“1 小鼠有明显的增高。 结论： 1．工C组织中肥大细胞被激活脱颗粒后，颗粒中炎症物质释放可能是IC产 生膀胱痛疼综合症状的重要因素，但不是决定性因素。肥大细胞浸润密度、肥 大细胞激活脱颗粒状态与PUF评分联合应用可作为珍断IC的重要工具之一。 2．IC患者组只有肥大细胞出现雌激素受体的过表达，肥大细胞为雌激素 在IC患者膀胱黏膜上的重要靶点；雌激素可能通过其在肥大细胞上的受体表达 来调控肥大细胞脱颗粒，产生fuj质性膀胱炎特有的临床症状。 3．虽然膀胱上皮表达了卵清蛋白做为自身抗原的URO—OVA小鼠没有fjI 现免疫反应，但是转基因卵清蛋fi仍然_』L有抗原性。静脉注射活化的OT—I小鼠 CD8+T细胞之后URO—OVA小鼠出现了明湿的膀胱自身免疫炎性反应，病理 检查证实其与IC患者的膀胱组织表现相似。而B6及UR0一OVA／Ki t““小鼠没彳r 天津医科人学博十!学位论文或只出现较轻的膀胱炎性反应，这充分既明肥大细胞在IC的发病中起了关键的 天津医科人学博十!学位论文 或只出