E1010葡萄糖氧化酶(GOD)法测定试剂盒TOOS 说明书.docVIP

普利莱基因技术有限公司 电话：01062027915 Email: sale@ PAGE Applygen Technologies Inc. Rev 0908 Page PAGE 1 of 1 葡萄糖测定试剂盒-氧化酶法?(Glucose Oxidase Method, GOD) E1010 描述：葡萄糖为组织细胞提供能量。生理性饥饿、剧烈运动、营养不良状态血糖降低，肥胖、糖尿病等疾病血糖升高。试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，是世界卫生组织和中国《全国临床检验操作规程》推荐的临床血糖检测方法。经过改良使灵敏度比普通方法提高约10倍至5~10μmol/L，线性范围10~20000 μmol/L。可检测血液、食品饮料，以及组织细胞内低浓度葡萄糖含量，胜任各种临床和基础实验测量。 原理：根据Trinder反应原理1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)；然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺，颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。 用途：测定人及动物血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。尿液葡萄糖测定推荐使用“邻甲苯胺(o-Toluidine)法试剂盒#E1011”。 组成 (205次微量检测, 50次1ml检测)：(1) 0.5 ml葡萄糖标准品10 mmol/L (等于180 mg/100 ml)；(2) 32 ml试剂R1；(3) 8 ml试剂R2。常温运输。到达后避光4 oC保存3月。 所需设备：721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm，如仪器无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。 配制工作溶液：按4:1比例，取8 ml试剂R1，与2 ml试剂 R2混合得到10 ml 工作溶液。当天使用或4oC保存1周。 标准品稀释：10 mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625μM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽，通常设置黑体标记的4管即可，不需要设置 2~10mM的标准管，以此得到的标准曲线用来2 mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液。 三、测定操作： 参见下表加样。先加标准品或待测样品，后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。 37oC 20min (15~30min)。或25oC室温反应30 min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。 先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD550或570nm值。 绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度。Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。 如果仅用单一标准管：葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (样品OD－空白OD) / (标准管OD－空白管OD)。 加样与测定表(可微量调整样品与工作液体积比例) 微板测试，反应体积200μl 比色杯测试，反应体积800 μl 空白管 标准管 测定管 空白管 标准管 测定管 蒸馏水μl 5 蒸馏水μl 20 标准品μl 5 标准品μl 20 标品 μl 5 标品 μl 20 工作溶液μl 195 195 195 工作溶液μl 780 780 780 说明： 人空腹血糖参考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl)，低血糖症临界水平2.7-3.89 mmol/L，高血糖症临界水平6.11-7.22 mmol/L。不同单位之间的换算公式：1 mmol/L = 0.0555 mg/100 ml (dL)；1 mmol/L × 18 = 1 mg/100 ml (dL)。 检测线性范围0.02~20 mmol/L。浓度超过20 mmol/L用蒸馏水或生理盐水稀释1-2倍后测量。批内变异系数为0.7~2.0%，批间变异系数为~2%。准确度与精密度达到临床检测要求。 不能直接测定尿液葡萄糖含量。尿液中尿酸浓度比较高，会消耗葡萄糖氧化酶反应中产生的过氧化氢，降低呈色反应，从而引起负误差使结果偏低。还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红