血红蛋白提取和分离(shk).pptVIP

学习目标 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 1.样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀释；离心等操作收集到血红蛋白溶液。 2.粗分离：透析除去分子较小的杂质。 3.纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 4.纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 小结：样品处理和粗分离 1、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。 2、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放 3、分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。 4、透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。去除小分子杂质。 练习巩固 7.相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 9.在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是 A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次 序，降低分离效果 B、气泡阻碍蛋白质的运动 C、气泡与蛋白质发生化学反应 D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密 10.样品的加入和洗脱的操作不正确的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A． 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝