反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸.docVIP

分 析 化 学 实 验 报 告 实 验 名 称：反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸 专 业： 化学教育 班 级： 11化学班 姓 名： 指 导 教 师： 郭老师 日 期： 2013.9.7 一、实验目的 1、学习高效液相色谱仪的操作。 2、了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。 实验原理 苯甲酸为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶，具有苯或甲醛的臭味。熔点122.13℃，沸点249℃，相对密度1.2659（15/4℃）。在100℃时迅速升华，它的蒸气有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强。苯甲酸是重要的酸型食品防腐剂。在酸性条件下，对霉菌、酵母和细菌均有抑制作用，但对产酸菌作用较弱。抑菌的最适pH值为2.5～4.0，一般以低于pH值4.5～5.0为宜。在食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁，最大使用量不得超过2.0g/kg；在果酱(不包括罐头)、果汁(味)型饮料、酱油、食醋中最大使用量1.0g/kg；在软糖、葡萄酒、果酒中最大使用量0.8g/kg；在低盐酱菜、酱类、蜜饯，最大使用量0.5g/kg；在碳酸饮料中最大使用量0.2g/kg。 用高效液相色谱法将饮料中的苯甲酸与其它组分（如：柠檬酸（钠）、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的苯甲酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的苯甲酸含量。 三、仪器和试剂 1、Agilent 1220高效液相色谱仪。 2、色谱柱：Kromasil C18，5μ 150×4.6mm。 3、流动相：75%甲醇（色谱纯）+25%PH=3.3的磷酸缓冲溶液（过三次）。 4、苯甲酸标准贮备溶液：准确称取0.0109g含量99.5%苯甲酸，用过三次的蒸馏水溶解，定量至50mL容量瓶中，并稀释至刻度。标样浓度217μg·mL-1。 4、测饮料试液：雪碧 四、实验内容 将标准贮备液分别稀释为0.434、0.868、2.17、4.34、8.68、21.7、43.4μg·mL-1的标准系列溶液，并贴上标签。（稀释为50mL） 谱仪器条件： 泵的流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：20μL；柱温：室温。 仪器基线稳定后，进苯甲酸标准样，浓度由低到高。 品处理如下：（1）将约100mL雪碧置于一100mL洁净、干燥的烧杯中，用超声波脱气10min，以赶尽雪碧中二氧化碳。取5mL雪碧样品转移至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。 将雪碧样品注入2mL样品瓶中备用。 “Agilent 1220高效液相色谱仪操作规程”分析饮料试液。 结果处理 C=43.4时的谱图为下图1： 图1 样品谱图为下图2： 图2 3、各浓度及数据 浓度 名称 进样量/uL 保留时间 峰面积 峰面积% 峰高 峰高率% 0.434 20 2.493 197980 1.45 24630 4.3 0.868 20 2.497 453265 3.4 31197 5.85 2.17 20 2.497 386212 2.75 54662 8.93 4.34 20 2.497 1071753 8.03 104943 15.38 8.68 20 2.493 1745436 13.04 194278 26.76 21.7 20 2.497 3770842 22.33 460241 46.57 43.4 20 2.500 7327483 37.58 888156 64.26 样品 20 2.507 3788329 32.00 370162 43.42 五、计算苯甲酸的含量 由标准曲线可得：C=（A-223503）/164090 A为样品峰面积；A=3788329 算得C=21.725ug/mL