化妆品致畸试验.doc

附件10 致畸试验 Teratogenicity Test 1 范围 本规范规定了动物致畸试验的基本原则，试验方法和技术要求。 本规范用于检测化妆品原料的致畸作用。 2 术语和定义 2.1 致畸性 teratogenicity 化学物质在器官发生期间引起子代永久性结构异常的特性。 2.2 母体毒性 maternal toxicity 化学物质引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。 3 试验原理与目的 母体在孕期受到可通过胎盘屏障的某种有害物质作用，影响胚胎的器官分化与发育，导致结构异常，出现胎仔畸形。在胚胎发育的器官形成期给予妊娠动物化学物质，可检测该化学物质对胎仔的致畸作用。 检测妊娠动物接触化妆品原料后引起胎仔畸形的可能性，预测其对人体可能的致畸性。 4 仪器和试剂 4.1 仪器和器材 实验室常用设备、生物显微镜、体视显微镜、游标卡尺、电子天平。 4.2 主要试剂 4.2.1 甲醛、冰乙酸、2,4,6-三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红。 4.2.2 茜素红储备液：以50% 乙酸为溶剂的茜素红饱和液5.0mL，甘油10.0mL，1%水合氯醛60.0mL混合，存于棕色瓶中。 4.2.3 茜素红应用液：取储备液3mL～5mL，用10g/L～20g/L氢氧化钾液稀释至1000mL，存于棕色瓶中。 4.2.4 茜素红溶液：茜素红0.1g，氢氧化钾10g，蒸馏水1000 mL，临用时配制（剥皮法骨骼染色法）。 4.2.5 透明液A：甘油200mL，氢氧化钾10g，蒸馏水790mL混合。 4.2.6 透明液B：甘油与蒸馏水等体积混合。 4.2.7 固定液（Bouins液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸饱和液）75份、40 %甲醛20份、冰乙酸5份。 5 试验方法 5.1 受试物 受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应对受试物进行适当处理。 5.2 实验动物和饲养环境 5.2.1 动物选择：啮齿动物首选大鼠，非啮齿类动物首选家兔。若选其他物种应给出理由。选用健康、性成熟的雄性动物和未经交配的雌性动物，试验开始时动物体重的差异不应超过平均体重的±20%，所用动物应注明种类、品系、性别、体重和周龄。 5.2.2 动物数量：性成熟的雄鼠和雌鼠通常按1:1或1:2比例合笼交配，如果5d内未交配，应更换雄鼠。为了获得足够的胎仔来评价其致畸作用，大鼠每个剂量水平的怀孕动物数不少于16只，家兔每个剂量水平的怀孕动物数不少于12只。 5.2.3 动物的准备和饲养：实验动物及实验动物房应符合国家相应标准和规定。实验动物在试验前应至少进行3d～5d的环境适应和检疫观察，试验期间动物自由饮水和摄食，妊娠动物应单笼饲养。 5.3 剂量和分组 试验至少设3个剂量组，同时设溶剂对照组，溶剂对照组除不给受试物外，其余处理均同剂量组。必要时设阳性对照组，常用经口给予的阳性对照物为敌枯双、五氯酚钠、阿司匹林及维生素A等，或者用环磷酰胺于孕第12d腹腔注射1次。曾用阳性物开展过致畸试验、并在所用实验动物种系有阳性结果发现，试验可略去设置阳性对照组。 高剂量组原则上应使部分动物出现某些发育毒性和（或）母体毒性，如体重轻度减轻等，但不至于引起死亡或严重疾病，如果母体动物有死亡发生，应不超过母体动物数量的10%。低剂量组不应出现任何观察到的母体毒性或发育毒性作用。建议递减剂量系列的组间距2倍～4倍比较合适，当组间差距较大时（如超过10倍）加设一个试验组。 试验剂量的设计参考急性毒性试验剂量、28天经口毒性试验、90天经口毒性试验剂量和人体实际摄入量进行。对于能求出LD50的受试物，根据LD50值和剂量-反应关系曲线斜率设计高剂量组的剂量。对于求不出LD50的受试物，如果28天或90天经口毒性试验未观察到有害作用，以最大未观察到有害作用剂量作为高剂量；如果28天或90天经口毒性试验观察到有害作用，以最小观察到有害作用剂量为高剂量组，以下设2个剂量组。设置剂量水平时还应参考受试物的其他毒理学资料。 5.4 试验步骤和观察指标 5.4.1 “受孕动物”的检出 对于大鼠，雌、雄性动物同笼后，每日早晨对雌鼠检查阴栓（或阴道涂片），查出阴栓（或精子），认为该动物已交配，当天作为“受孕”零天。对于家兔，雌兔和雄兔合笼后阴道涂片检查到精子当日作为“受孕”零天。检出的“受孕动物”按随机分组，并称重和编号。 5.4.2 受试物的给予途径 受试物通常经口灌胃给予，若选用其他途径应说明理由。通常，在器官形成期给予受试物(大鼠孕期6d~15d，家兔孕期6d~18d)。受试物灌胃给予时，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶剂中，首选溶剂为水，不溶于水的受试物可使用植物油（如玉米油、橄榄油等），不溶于水或油的受试物亦可使用羧甲基纤维素、淀粉等配