基因诊疗和基因治疗教案.pptVIP

基因诊疗和基因治疗教案;第一节 基因诊断学基础 第二节 遗传病的基因诊断 第三节 肿瘤的基因诊断 第四节 基因诊断在法医学上的应用 第五节 基因治疗的概念及策略;第一节  基因诊断学基础Basis of Gene Diagnostics;基因诊断之父—简悦威;一、基因诊断的概念、特点及临床意义 ;诊断依据(遗传物质改变) DNA、RNA或蛋白质水平变化，如病毒基因及其转录产物在体内从无到有、癌基因表达水平从低到高； 基因结构变化，如点突变引起基因失活、染色体转位引起基因异常激活或灭活。;基因诊断的特点 高特异性 高灵敏性 早期诊断性 应用广泛性;二、基因诊断中常用的分子生物学技术;（三）单链构象多态性分析（single-strand conformation polymorphism, SSCP）;PCR-SSCP分析原理示意;正常人;基因诊断中常用的分子生物学方法比较;三、 基因诊断技术路线与方法;（一）直接诊断途径;5/—;斑点杂交、反向斑点杂交 AS-PCR、PCR-SSCP、 PCR-ASO、 PCR产物直接测序; 在DNA序列上有一段较长序列的重新排布。包括数十个碱基到数千个碱基的丢失、插入、替换、重复和倒位等，以及染色体突变或畸变，包括染色体的易位、缺失或染色三体（如唐氏综合征）等。 ;3. 基因表达异常的检测 mRNA的相对定量分析 mRNA的绝对定量分析 mRNA长度分析;（二）间接诊断途径; DNA多态性：指群体中的DNA分子存在至少两种不同的类型，即个体间同一染色体的相同位置上核苷酸序列存在一定的差异或变异。 多在进化中形成，本身并不致病，只是与某些遗传性致病基因有一定连锁关系。;间接诊断：检测与致病基因连锁的遗传标记;第五节 基因治疗的概念及策略 Concept and Strategy of Gene Therapy;定义： 通过在特定靶细胞中表达该细胞本来不表达的基因，或采用特定方式关闭、抑制异常表达的基因，达到治疗疾病目的的治疗方法。 ;本节内容提要; 一、基因治疗的策略; （一）基因置换（gene replacement） ;（二） 基因添加（gene augmentation） ;（三）基因干预（gene interference） 定义： 采用特定的方式抑制??个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。;定义：将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。 应用：是恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。 ;自杀基因的作用机制 ; （五）基因免疫治疗;二、基因转移技术 ;基因治疗的两种途径; 基因转移(gene transfer)技术 ; 1.病毒介导的基因转移系统;;反转录病毒介导的基因转移系统 ——由两部分组成;Retroviral packaging system; （2）腺病毒(adenovirus)载体 腺病毒是一种大分子(36 kb)双链无包膜DNA病毒。它通过受体介导的内吞作用进入细胞内，然后腺病毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入宿主细胞基因组中。 ;腺病毒的优点 ; 2.非病毒载体介导的基因转移系统 （1）脂质体介导的基因转移技术 脂质体介导的基因转移技术使用方便、成本低廉。 基本原理:利用阳离子脂质体单体与DNA混合后，可以自动形成包埋外源DNA的脂质体，然后与细胞一起孵育，即可通过细胞内吞作用将外源DNA（即目的基因）转移至细胞内，并进行表达。 ; 脂质体介导的基因转移示意图; （2）受体介导转移技术 ;受体介导转移技术示意图; （3）基因直接注射技术 不需要进行基因工程的繁琐操作，直接将裸露DNA注入动物肌肉或某些器官组织内。 动物实验表明：接受注射外源DNA的小鼠能够按其基因编码合成相应的蛋白质，并能维持数月之久。 将促进心脏血管生长的基因直接注入实验鼠的心脏，可使其心脏壁内毛细血管增加30%～40%； 将胰岛素基因直接注入鼠骨骼肌细胞，能分泌糖尿病所缺少的胰岛素； 肌内注射凝血因子Ⅸ基因，可产生血友病所需的凝血因子Ⅸ 。; 三、基因干预 （gene interference