VP试验标准操作规程.doc

VP试验标准操作规程 1．目的 规范规范VP试验标准操作规程。 2．原理 某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步代谢分解为乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境下被空气中的氧氧化成为二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等所含的胍基结合，形成红色的化合物，即VP试验阳性。 3．试剂 3.1 葡萄糖蛋白胨水培养基成分 多价蛋白胨 7g 葡萄糖 5g 磷酸氢二钾 5g 蒸馏水 1000ml PH 7.2 3.2 制备 将上述成分混合溶解后，分装小试管，高压120℃灭菌15分钟。 3.3 试剂 甲液：6％ɑ萘酚酒精溶液； 乙液：40％KOH溶液 4．质控 大肠埃希菌ACTT 25922为无红色出现，肺炎克雷伯菌ACTT 13883为红色。 5.操作步骤 5.1 将待检菌接种至葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2日。 5.2 观察方法-贝氏（Barritt）法 观察时按每2ml培养液加甲液1ml、乙液0.4ml混合，置35℃，15～30分钟出现红色为阳性。若无红色，应置37℃，4小时后再判定，本法较奥氏法敏感。 6.结果判断 呈红色者为阳性。 7.注意事项 7.1 许多实验室工作人员有一个错误的印象，即VP试验阳性菌甲基红试验自然是阴性，或反之亦然。实际上，肠杆菌科的大多数细菌产生相反的反应（由于乙酰甲基甲醇形成碱性，导致甲基红试验阴性和VP试验阳性）。某些细菌如蜂房哈夫尼菌和奇异变形杆菌，35℃培养可产生甲基红试验和VP试验同时阳性反应，后者常延迟出现。 7.2 ɑ萘酚酒精溶液易失效，试剂放室温暗处可保存1个月。KOH溶液可长期保存。国内多采用贝氏法。 8.临床意义 本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性，反之亦然。如大肠埃希菌、沙门菌等甲基红呈阳性反应，而VP试验则为阴性；相反，如沙雷菌、阴沟杆菌等，VP试验阳性，而甲基红反应为阴性。