甲基红试验标准操作规程.doc

甲基红试验标准操作规程 1．目的 规范规范甲基红试验标准操作规程。 2．原理 某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步代谢分解为乳酸、甲酸、乙酸，使培养基的ph下降到4.5以下，加入甲基红指示剂即显红色（甲基红变红的范围为ph4.4～6.0）；某些细菌虽能分解葡萄糖，但产糖量少，培养基的ph在6.2以上，加入甲基红指示剂呈黄色。 3．试剂 3.1 葡萄糖蛋白胨水培养基成分 多价蛋白胨 7g 葡萄糖 5g 磷酸氢二钾 5g 蒸馏水 1000ml PH 7.2 3.2 制备 将上述成分混合溶解后，分装小试管，高压120℃灭菌15分钟。 3.3 试剂 甲基红 0.1g 95％乙醇 300 ml 蒸馏水 200ml 4．质控 大肠埃希菌ACTT 25922为红色，阴沟肠杆菌ACTT 13047为黄色。 5.操作步骤 将待检菌接种至葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2日，加入甲基红试剂2滴，立即观察结果。 6.结果判断 红色者为阳性，黄色者为阴性。 7.注意事项 7.1 培养基中的蛋白胨水可影响甲基红试验结果，在使用每批蛋白胨水之前用已知甲基红阳性菌和阴性菌做质量检测。 7.2 甲基红反应并不因增加葡萄糖的浓度而加快。 7.3 孵育时间不得少于48小时，若过早地判断结果，往往可造成假阴性。 8.临床意义 主要应用于鉴别大肠杆菌和产气杆菌。