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氧化酶试验标准操作规程
1.目的
规范氧化酶试验标准操作规程。
2.原理
氧化酶(细胞色素氧化酶)是细胞色素酶呼吸系统的酶。具有氧化酶的细菌,首先使细胞色素C氧化,再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化,生成有色的琨类化合物。
3.试剂
盐酸二甲基对苯二胺(或四甲基对苯二胺)0.1g加蒸馏水10ml,置棕色瓶内可用一周。冰箱保存,或分装于棕色瓶内密封。
4.质控
铜绿假单胞菌ATCC27853阳性,大肠埃希菌ATCC25922阴性。
5.操作步骤
取洁净的滤纸一小块,蘸取菌苔少许,加1滴10g∕L盐酸二甲基对苯二胺溶液于菌落上,观察颜色变化。
6.结果判断
立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性。。
7.注意事项
7.1 试剂在空气中易氧化,故应经常更换新试剂,或配制时试剂内加入0.1%维生素C以减少自身氧化。
7.2 不宜采用含葡萄糖培养基上的菌落(葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性)。
7.3 实验时应避开含铁的培养基等含铁物质,因本试验过程中,遇铁时会出现假阳性。
8.临床意义
8.1 用于奈瑟氏菌、非发酵菌等细菌的鉴定。
8.2 所有的革兰阴性菌均应进行氧化酶试验,如果肠杆菌科不进行本试验,则可能将氧化酶阳性的嗜水气单胞菌错误地鉴定为大肠埃希菌或沙雷菌。
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